Птенцы из шишек: Аппликация «Птенец» из природных материалов

Как гуманно разделить курицу на ужин

Как мой наставник, Стив Микс поместил старого петуха в конус для убийства и вынул нож, он сказал что-то, я никогда не забуду.

«Каждый день должно что-то умирать, чтобы вы могли жить».

Вау.Это действительно так?

Г-н Микс пояснил: «Смерть — это некрасиво, не так ли? Это уродливо и ужасно, но каждый день что-то умирает, чтобы вы могли жить. Это может быть курица, может быть кочан салата или дуб где-нибудь в лесу, но все умирает, чтобы вы могли жить ».

В этой статье я объясню, почему вы хотите забить своих кур и как это сделать. В конце статьи я предлагаю печатный пакет PDF с моим собственным списком продуктов, контрольным списком подготовки и пошаговыми инструкциями.

Тем из нас, кто хочет выращивать пищу и проявлять большее уважение к животным, которые обеспечивают это для нас, мы возьмем процесс забоя в свои руки.

Обработка цыплят означает гораздо лучшую смерть для нашего мяса, чем фабричная альтернатива.

Вот небольшой документальный фильм о фермере Purdue.

В этой статье я покажу вам необходимые инструменты и дам пошаговые инструкции о том, как гуманно забить цыплят.

В конце статьи я предлагаю свой контрольный список в формате PDF и инструкции, которые вы можете взять с собой на следующую бойню.

Вы можете выполнить эту работу, используя только нож, кастрюлю, огонь и немного проточной воды.

Однако добавление некоторых стратегических инструментов и оборудования может иметь большое значение для более эффективной обработки цыплят.

(Примечание: это инструменты, которые я действительно использую и рекомендую.Возможно, вам будет интересно узнать, что некоторые из ссылок являются партнерскими, что означает, что я получу комиссию, если вы купите)

Клетка для перевозки птицы используется для хранения живых цыплят, пока вы обрабатываете остальных.

Отлов цыплят и обеспечение их легкого доступа имеют важное значение для бесперебойной работы.

В этой клетке не должно быть ничего особенного.

Я использовал мобильный загон для выпаса птицы рядом с местом, где мы обрабатываем.

Для меньшего количества я использовал старую клетку, которая стояла у меня на ферме. Для большего удобства вы можете выбрать клетку для перевозки птицы.

Ограничивающие конусы (также известные как конусы убийства) отлично подходят для удержания птицы на месте во время убийства, и они удерживают их на месте, если после убийства сработают нервы, и птица начнет прыгать. Таким образом, у вас не будет «цыпленка, который бегает с отрезанной головой».

Кроме того, я считаю, что перевертывание их ног заставляет кровь течь к их голове, создавая успокаивающий эффект.

Я также считаю, что положение цыплят в «объятиях» в шишках успокаивает их нервы.

Очень важно успокоить цыпленка перед умерщвлением.

Курица, находящаяся в стрессе, может означать потерю уровня гликогена, что отрицательно скажется на вкусе, нежности, цвете и лежкости мяса.

Мы не хотим, чтобы вся наша хорошая жизнь цыпленка была напрасной из-за чрезмерного стресса в конце ее жизни.

Чтобы узнать больше об этой теории, прочтите эту статью.

Я сделал свои собственные ограничивающие конусы из использованных дорожных конусов, прикрепленных к доске. В другой раз я придал форму для этой работы.

Я не уверен в санитарно-гигиенических характеристиках дорожных конусов, мои конусы из листового металла были хрупкими, и меня постоянно порезали.

Наконец-то я остановил свой выбор на ограничительном конусе из нержавеющей стали.

Если вам нужно отказаться от использования конуса для убийства, вы можете просто повесить курицу вверх ногами на веревке.

Другой вариант — использовать фартук, чтобы положить курицу между ног, головой вниз, чтобы убить.

Вы можете посмотреть видео очень мирного убийства в фартуке.

(Примечание: это инструменты, которые я действительно использую и рекомендую. Вам может быть интересно узнать, что некоторые из ссылок являются партнерскими ссылками, что означает, что я получу комиссию, если вы купите)

Необходимы острые ножи .Если у вас есть только один, я предлагаю универсальный нож от пяти до шести дюймов. Вы можете добавить нож меньшего размера (с лезвием около 3 дюймов), если хотите, для более мелких разрезов.

Я использую единственный 5-дюймовый нож, который больше не продается, а мое 3-дюймовое лезвие было изготовлено на заказ у друга. Если бы я заменил их, я бы купил что-то вроде этого:

6-дюймовый универсальный нож для обвалки от Victorinox.

Вот красивый 3-дюймовый нож от Victorinox.

Вот 8-дюймовый нож, которым я пользуюсь, когда разрезаю курицу на куски.

Чтобы научиться точить ножи, мне нравится это обучающее видео от мастера по лезвиям Боба Крамера:

Для заточки я использую 6-дюймовую систему заточки Tri-Hone Смита, которую мне подарил друг. Сгодится чуть меньше 30 долларов.

Один из точильных камней отклеился всего за два использования, поэтому, когда мне нужно его заменить, я могу использовать что-то вроде этого.

Хонинговальная сталь — это стальной стержень, используемый для выравнивания кромок ножей.Сталь следует использовать регулярно, чтобы поддерживать острие ножа. Я использую круглую сталь Victorinox:

Видео о том, как использовать хонинговальную сталь, мастер по изготовлению лезвий Боб Крамерс, смотрите здесь.

Секаторы используются для отрезания головы (если вы не хотите ее отрывать) и отрезания шеи, если вы не хотите, чтобы шея оставалась прикрепленной. Мне нравится качественный секатор Felco F-2 Class.

Водонепроницаемый фартук для сохранения сухости тела. Я устал пропитываться водой, зараженной куриным кишечником, поэтому я купил пулю и получил водонепроницаемый фартук.

Водонепроницаемые сапоги для того, чтобы ноги оставались сухими.

Я пользуюсь недорогим набором от Servas уже много лет, но пользуюсь примерно двумя в год.

Мне было бы интересно узнать, потрачу ли я больше денег, чтобы получить более долговечные ботинки.

Я слышал кое-что хорошее о Muck Boots от коллег-пермакологов, так что, может быть, я попробую пару таких в следующий раз.На Muck даже годовая гарантия!

(Примечание: это инструменты, которые я действительно использую и рекомендую. Вам может быть интересно узнать, что некоторые из ссылок являются партнерскими ссылками, что означает, что я получу комиссию, если вы совершите покупку.)

Ковши классически незаменимы на ферме, и они являются важнейшим элементом в этой операции.

Вот все способы использования ведер для убоя:

• Сифон сливной из раковины
• Кровь под ограничивающими конусами
• Удерживайте внутренние кишки и другие части, которые вам не нужны.
• Поймать или хранить перья

Вы можете приобрести использованные ведра в продуктовом магазине или на сайте Craigslist.

Вы, безусловно, можете купить их на ферме, в саду, в продовольственном магазине или в Интернете.

Scalder — еще одна необходимая вещь, которая может быть такой же простой, как большая кастрюля на открытом огне.

Работая в приюте в Гондурасе, я обрабатывал 600 цыплят в день, используя одну большую кастрюлю над огнем.

Чтобы облегчить жизнь, вы можете использовать уличную газовую плиту для большего контроля.Я использовал это много лет.

Фритюрница для индейки на открытом воздухе имеет одну конфорку и отлично подойдет для ошпаривания.

Чтобы сделать жизнь проще, воспользуйтесь электрическим шпателем. Я использую этот от Dux Industries, и он мне очень нравится.

Основным преимуществом этого ошейника является то, что вы можете установить желаемую температуру, и он будет автоматически поддерживать эту температуру.

В кастрюлях над огнем и газовых плитах вам нужно вручную поддерживать температуру на протяжении всего процесса. Аппараты для заваривания с регулируемой температурой могут избавить от стресса и труда.

Вы можете сделать его более эффективным, добавив слой пенополистирола снаружи коробки для изоляции и, конечно, использовать какую-нибудь крышку, пока она нагревается. Поднимите воду, добавив сначала теплую воду, чтобы не было достаточно холодной воды для нагрева. Если кипящая вода должна начинаться с холодной воды, на нагрев может уйти несколько часов, поэтому планируйте это соответствующим образом.

Если вы занимаетесь более крупной производственной деятельностью (обрабатываете 50 или более цыплят за раз), вы можете подумать о ошпарке коммерческого класса от Featherman или о чем-то подобном.

Featherman даже имеет автоматический дункер и может обрабатывать несколько цыплят за раз.

(Примечание: это инструменты, которые я действительно использую и рекомендую. Вам может быть интересно узнать, что некоторые из ссылок являются партнерскими ссылками, что означает, что я получу комиссию, если вы купите)

Жидкое мыло полезно в кипящей воде и значительно облегчит напряжение между кожей и перьями, облегчая выход перьев. Я просто наливаю немного Shaklee Basic H, но подойдет любое экологически чистое мыло.

Термометр полезен для контроля температуры кипящей воды.

Даже если вы используете электрический шпатель с автоматической настройкой, вам нужно будет следить за процессом разогрева и дважды проверять свою температуру на протяжении всего процесса.

Вот тот, который я использую.

Кочерга для ошпаривания — это своего рода выколачивающий инструмент, с помощью которого курица перемещается, пока она находится в ошпаривателе.Если вы экономите ноги (для куриного бульона), вы не хотите ошпаривать курицу, придерживая за ноги, потому что ногам потребуется изрядная доля времени в кипящей воде.

Я использую ручной культиватор с 3 зубьями, подобный этому.

Вот такой, похожий на тот, что у меня есть.

Удлинители для подключения к источнику питания (при необходимости). Вот ассортимент шнуров для тяжелых условий эксплуатации.

Разветвитель для подключения электрического шпателя и щипчика.Возьмите один почти где угодно или найдите его на Amazon.

Machine Plucker для ощипывания может упростить процесс ощипывания. Щипок необязателен и не обязателен, если вы собираете небольшое количество птиц или если хотите ощипать вручную.

На то, чтобы ощипать одну птицу вручную, у меня уходит около десяти минут, но я могу ощипать курицу с помощью машинного щипца примерно за 30 секунд.

Наша стажера, Дезире, помнит, как ее семья из четырех человек за один день собирала свой многолетний запас цыплят (всего 50 цыплят).

Для тех, кому нужен щипчик, вот несколько идей:

Вариант со съемником № 1 — Буровой отбойник

Это будет ощипывать по одной курице за раз, и это будет своего рода улучшением, если вы будете делать это вручную.

Один друг принес один из них на одну из наших забойных работ, но нам было трудно настроить буровую установку, чтобы она оставалась на месте и бежала, не удерживая спусковой крючок.

Кроме того, я не думаю, что у нас было достаточно сильное сверло, и его было проще выдергивать вручную.

Однако, поискав в Интернете, я решил, что есть несколько лучших вариантов.

Я почти купил это, чтобы продемонстрировать это, но у меня уже есть сверхмощный сборщик, поэтому я сэкономил деньги.

Видео этого щупа здесь.

Я хотел бы услышать мнение любого, кто успешно использовал хороший дрель.

Плукер, вариант № 2 — Плунжер барабанного типа

Это позволит ощипать по одной курице примерно за 30 секунд.Я вытащил свой всего за одну птицу а целых 50.

Я лично использую этот щипчик и считаю, что это отличный выбор для приусадебного уровня.

Я получил свой от куриц Стромбергса здесь.

Plucker option # 3 — Commercial Plucker (50 или более цыплят)

Они ощипывают 3 или более цыплят за раз, что может сэкономить вам много времени, если вы ощипываете большое количество птиц.

Это такие щипцы, которые Джоэл Салатин использует для обработки 100 цыплят в день.

Featherman, кажется, делает неплохие. Вы можете найти их здесь.

Я заранее арендовал один и обнаружил, что он быстро и легко ощипывает несколько цыплят за раз, однако я обнаружил, что он слишком велик для моей операции, так как я никогда не делал больше 50 цыплят за раз.

Кстати об аренде. Возможно, вам стоит арендовать это оборудование (если оно есть в вашем районе).

Поищите на сайте Craigslist или позвоните местным фермерам, чтобы узнать, разрешат ли они вам сдавать их вещи в аренду. Если необходимо, арендуйте дом с друзьями, которым тоже нужно зарезать цыплят.

Я редко забиваю мясо в одиночку, потому что кому-то гораздо веселее и эффективнее приносить свою птицу, и мы все участвуем в переработке всех цыплят.

(Примечание: это инструменты, которые я действительно использую и рекомендую. Возможно, вы захотите узнать, что некоторые из ссылок являются партнерскими ссылками, что означает, что я получу комиссию, если вы купите)

Большой котелок , наполненный холодной водой, можно использовать для того, чтобы окунуть курицу в холодную воду, чтобы быстро охладить птицу после ожога и предотвратить дальнейшее ошпаривание.

Охлаждающий горшок не является обязательным, но он даст вам больше контроля и не потребует особых усилий.

У вас, вероятно, уже есть один из них, но если нет, что-то вроде этого отлично подойдет.

Раковина и стол обработки в каком-то роде обязательны.

Для небольших операций вы можете использовать кухонную мойку, но большинство из них в любом случае предпочитают специальную мойку для обработки.

Я купил двойную раковину со стойкой на моем местном дворе металлолома примерно за 20 долларов.Я купил кухонный смеситель с распылительной головкой и добавил его в раковину, но вы можете использовать шланги с садовым распылителем.

Я использую шланги, безопасные для питьевой воды, так как буду распылять еду самостоятельно.

Если вы не заинтересованы в создании собственной раковины и стола, вы можете выбрать готовый мобильный стол для разделки мяса, подобный этому.

Или что-то более сложное и рассчитанное на двоих вроде этого.

Мыло для рук и полотенца отлично подходят для мытья посуды, если вам нужно сделать перерыв.

Чаша (и) из нержавеющей стали , наполненная холодной ледяной водой, отлично подходит для разделения и хранения таких вещей, как шеи, органы и ступни.

Выберите тот, который соответствует вашим потребностям.

Охладители , заполненные ледяной водой, быстро охлаждают готовых цыплят после их разделки. В этом нет необходимости, если вы обрабатываете только несколько птиц, но если вы собираетесь ненадолго прогуляться, храните цыплят в прохладной воде.

Подойдет любой домашний кулер, но если вам нужно что-то большее и предназначенное для разделки мяса, подумайте о таком сверхмощном.

Транспортный лоток (и) удобен для транспортировки цыплят из холодильника, если это необходимо.

Я использую лотки из нержавеющей стали, чтобы переносить птиц внутрь моей жене Ребекке, которая сушит их и готовит для холодильника.

Мы обрабатываем больше цыплят, чем поместится в холодильнике, поэтому я захожу внутрь. Кто-то нам подарил, а этот такой же, как наш.

Подставка для сушки или полотенца для сушки курицы перед упаковкой на хранение.

(Примечание: это инструменты, которые я действительно использую и рекомендую. Вам может быть интересно узнать, что некоторые из ссылок являются партнерскими ссылками, что означает, что я получу комиссию, если вы купите)

Вакуумный упаковщик для удаления лишнего воздуха из пакетов для хранения во избежание обмерзания в морозильной камере. Мы подобрали ваш повседневный вакуумный упаковщик в Target. Вот наш вакуумный упаковщик на Amazon.

Пакеты для хранения птицы.Я использую специальные пакеты для вакуумного запечатывания (1 галлон или рулоны), которые идут в комплекте с моим вакуумным упаковщиком.

Пищевые весы для взвешивания готовой птицы, если хотите.

Я просто использую небольшие весы для упаковки, но подойдут любые весы для пищевых продуктов. Мы всегда отмечаем их по весу маркером, чтобы планировать приготовление.

Теперь, когда у нас есть все припасы, пора готовиться к разделке.

За неделю до забоя — Просмотрите свой контрольный список и закажите или заберите все необходимое до дня забоя.

За день до или в начале дня разделки.

• Обозначьте для обработки место в тени, с доступом к электричеству и водопроводу.

• Обустройте зону обработки накануне или рано утром в день убоя.

12 часов до — Отложите корм, чтобы убедиться, что их урожай пустой. Это не обязательно, но упрощает и упрощает обработку.

Я просто разделяю цыплят, которых собираюсь разделить, в клетку или загон для выпасных птиц (в зависимости от того, сколько я перерабатываю), прежде чем кормить утром в день забоя (так как у цыплят нет корма ночью) .

За 2–4 часа до — Подготовьте заварочный аппарат за достаточно времени, чтобы нагреться до желаемой температуры. Для нагрева воды до 145 градусов у электрической модели или костра может потребоваться несколько часов, поэтому планируйте это соответствующим образом.

Шаг № 1 — Поместите курицу в ограничивающий конус и осторожно протяните ее голову через дно.

Шаг № 2 — Возьмитесь за голову подчиненной рукой и быстро надрежьте боковую часть шеи как можно ближе к скуловой кости (это оптимизирует объем шеи, который вы можете сэкономить). Обязательно разрежьте достаточно сильно, чтобы пройти сквозь кожу в кровеносные вены, но не слишком сильно, чтобы начать резать шею и / или трахею. Как только вы перережете главную артерию, они потеряют сознание и больше не будут чувствовать боли.Нервы у цыплят могут сработать, и они начнут подпрыгивать, но будьте уверены, они без сознания или даже мертвы и ничего не чувствуют.

Шаг № 3 — Быстро разрежьте другую сторону шеи, чтобы вызвать быстрое кровотечение. Вы заметили фиолетовые, красные и черные пятна внутри куриного мяса из продуктового магазина? Это потому, что они, скорее всего, были оглушены электроникой до того, как им позволили истечь кровью.Оглушение вызовет остановку сердца, не позволяя всей крови вытечь из мяса.

Шаг № 4 — Согните курицу голову, чтобы вызвать кровотечение, и держите ее неподвижно, если нервы заставляют ее трястись. Если выходит много крови, вы успешно убили, если нет, вам нужно быстро разрезать еще раз, пока не потечет достаточное количество крови. Вначале у нее будет много крови, но через несколько секунд она значительно замедлится, а затем истечет до трех минут.

Шаг № 5 — Поместите курицу в кипящую воду. Заметьте, я не сказал кипяток. Мне нравится температура около 145 градусов.

Шаг № 6 — Тщательно и равномерно масштабируйте курицу, перемещая курицу с помощью какого-нибудь тыкающего устройства.

При 145 градусах требуется от 30 секунд до минуты. Вы можете проверить птицу во время ожога, постукивая по ее ногам и / или крыльям.Если ее ступни легко отслаиваются, а перья на крыльях легко вылезают наружу, значит, ожог хороший. Если не ошпарить достаточно долго, ощипать будет труднее. Если вы слишком долго ошпаривали, кожа цыплят начнет готовиться, может начать шелушиться и обесцвечиваться (желтоватая).

Шаг № 7 — Окуните жареную курицу в кастрюлю с прохладной водой, чтобы остановить процесс «варки».

Шаг № 8 — Выщипывайте курицу вручную или значительно ускорьте работу с помощью машины (до 10 раз быстрее).

Шаг № 9 — Удалите лишние волосы или перья.

Шаг № 10 — Снимите кожу со ступней.

Шаг № 11 — Удалите ногти с пальцев ног, согнув их и потянув против изгиба.

Шаг № 12 — Отрежьте ногу, разрезав ее между суставами.Поднимите курицу, чтобы раскрыть сустав.

Шаг № 13 — Отрежьте или отрежьте голову ножницами.

Шаг № 14 — Если вы собираетесь оставить голову для приготовления, сотрите налет с гребня и бороздок и ущипните клюв, чтобы оторвать кутикулу.

Шаг № 15 — При желании опалить. Вы заметите, что на туше могут остаться небольшие волоски.Вы можете удалить их, если хотите, вручную или с помощью горелки. Однако в их хранении нет ничего плохого. Я вручную вытаскиваю все важные патчи, но в остальном меня это особо не беспокоит.

Step # 16 — Обрежьте кожу вокруг основания шеи, чтобы обнажить урожай.

Шаг № 17 — Снимите злак с грудной кости снизу.

Шаг № 18 — Вставьте большой палец в шею между шеей, зобом, пищеводом и дыхательным горлом.

Шаг № 19 — Снимите урожай и кожу.

Шаг №20 — Обрежьте трубы вплотную к корпусу.

Шаг № 21 — Отрежьте шею ножницами, наклоненными вниз от тела, чтобы не было костей, которые можно было бы проткнуть в будущие пакеты для хранения.

Шаг № 22 — Отрежьте масляный сальник, надрезав его и вытянув.

Step # 23 — Сделайте небольшой разрез на коже живота как можно ближе к вентиляционному отверстию, чтобы не порезать внутренности. Случайное разрезание внутренностей может означать разрезание кишечника и высыпание зараженного бактериями материала.

Шаг № 24 — Откройте тушку двумя руками.

Шаг № 25 — Потянитесь внутрь, царапая грудную клетку ногтями, освобождая внутренности от тела. Некоторые люди могут предпочесть для этого использовать латексные перчатки.

Шаг № 26 — Зацепите пищевод пальцем или просто возьмитесь за внутренности и полностью вытащите их.

Шаг № 27 — Положите курицу на стойку с раковиной, в то время как внутренности подвешены к раковине. С помощью силы тяжести отрезали сердце и печень.Я жертвую часть печени, чтобы не перерезать желчный проток. Если перерезать желчный проток — ничего страшного, просто промойте птицу быстро.

Шаг № 28 — Положите сердце и печень в чашу из нержавеющей стали с холодной ледяной водой, если вы их экономите.

Шаг № 29 — Отрежьте желудок.

Если вы спасаете желудок, разрежьте его длинным путем с одного конца и удалите внутренности вместе с желтой подкладкой, промойте и отложите в сторону.

Шаг № 30 — При желании сохраните яички самцов для употребления в пищу.

Шаг № 31 — Обрежьте внутренности, разрезая как можно ближе к вентиляционному отверстию, чтобы сэкономить как можно больше жира.

Шаг № 32 — Вытяните легкие.Это может быть немного сложно и трудно объяснить. Протяните руку и погрузитесь в грудную клетку, царапая легкое ногтями, чтобы вытащить их.

Шаг № 33 — Ополосните птицу и поместите ее в холодильник.

Вы можете оставить птицу целиком или разрезать ее на части. Если вы хотите разрезать его, вот один способ сделать это.

Если вы хотите пойти дальше и развести птицу, вот как это сделать быстро и легко:

Отрежьте крылья , повернув птицу на бок, оттягивая крыло от тела.Потяните за крыло, пока вы делаете полукруг вокруг крыла. Крыло должно начать отделяться, когда вы будете тянуть и разрезать, и вы легко увидите, где можно разрезать под костью, чтобы удалить крыло. Я стараюсь резать как можно ближе к крылу, так как предпочитаю, чтобы лишнее мясо было на грудке, а не на крыле.

Разрежьте кожу между ног и туловищем, положив курицу на спину и разрезав как можно ближе вдоль ноги. Стрижка близко к ноге обеспечивает максимальное покрытие кожи груди.Я предпочитаю жертвовать небольшим количеством кожи на ноге, а не грудью.

Возьмите обе ноги вместе с цыпленком, чтобы открыть область между суставами для следующего разреза.

Отделите ногу от бедра, разрезав жирную линию.

Снимите заднюю часть , отрезав жирную линию, затем согнув и потянув, чтобы сломать и удалить.

Переверните грудку на , обнажив кость.Надрежьте кость в центре.

Вытолкните килевую кость , согнув грудку вверх и выдернув ее.

Разрезать грудку пополам

Вытрите курицу полотенцем.

Поместите в пакет для хранения и запечатайте вакуумом.

Взвесьте и наклейте этикетку.

Поместите в холодильник на три дня, чтобы мясо стало мягким, затем положите его в морозильную камеру для длительного хранения.

Теперь, когда вы закончили разделку, я должен упомянуть, как избавиться от всех ненужных товаров.

Накормите цыплят перьями или компостируйте их; перья полны белка, и то, что они не едят, разлагается и попадает в подстилку или побег.

Компост внутренности, кровь (если вы ее не употребляете) и любые другие неиспользованные части, закопав их глубоко внутри компостной кучи.Вы должны положить их глубоко (не менее 3 футов), иначе нежелательные животные выкопают вашу кучу.

Другой вариант — сбросить излишки на краю вашего участка, чтобы прокормить популяцию хищников, помогая утолить их голод чем-то другим, кроме ваших живых кур.

А … момент, которого мы все ждали. Пора готовить ужин.

Я на собственном опыте говорю вам, что немного радостей больше, чем сидеть за столом с друзьями или семьей, чтобы насладиться едой из своей страны.

Есть много способов приготовить эту курицу, но еженедельно для моих семей это простая выпечка.

• Промойте курицу.
• Намажьте птицу двумя-четырьмя столовыми ложками сливочного масла, чтобы она оставалась влажной во время запекания.
• Добавьте соль и перец по вкусу.
• Выпекать при температуре 350 градусов полтора часа.
• Мы готовим пару сезонных овощей и готовимся к быстрому, легкому и полезному обеду.

Я подготовил загружаемый (распечатанный) PDF-файл, который включает:

• Мой список принадлежностей для разделки мяса.
• Контрольный список, который я использую для подготовки к разделке.
• Пошаговая инструкция, которую нужно взять с собой на убойный стол.

Получите все ЗДЕСЬ!

Постройте конус для убоя птицы

Вы много работали и потратили много часов на то, чтобы вырастить свою красивую стаю мясных цыплят от яиц или цыплят до хороших жирных фритюрниц, ростеров или тушеных птиц.Они провели много часов, наблюдая за своими забавными выходками. Вы позаботились об их потребностях и при необходимости баловали их. Настал момент истины — довольно неприятная задача разделочного дня. Самое сложное в выращивании цыплят — это их убить. Но если вы хотите сесть за отличный ужин из жареной курицы, насладиться красиво фаршированным жареным или приготовить полезный куриный суп, вам нужно совершить грязное дело.

Есть много способов отправить курицу. В юности я помню день разделки мяса на ферме моих бабушек и дедушек в северной части штата Нью-Йорк. Они хватали цыпленка, бегающего за пределами курятника, шлепали его о старый пень и отрубали ему голову топором, а затем отпускали птицу, чтобы она бегала по двору, отчаянно ища потерянную голову, пока она не скончалась. Сегодня, вероятно, более уместна гораздо менее ужасная сцена. Перерезание спинного мозга топором обычно приводит к смерти птицы до того, как она успевает слить кровь с мяса.Если вы хотите получить птицу с лучшим вкусом, вы не хотите, чтобы в мясе застряла свернувшаяся кровь. Прикосновение руки к шее приводит к остановке сердцебиения, прежде чем вы сможете перерезать горло, чтобы кровь стекала. Сердце должно работать, чтобы адекватно слить всю кровь из птицы. Вероятно, лучший способ справиться с цыпленком во время разделки — это разрезать яремную вену на шее и позволить бьющемуся куриному сердцу выкачать всю кровь из его мяса и тела. Лучший способ сделать это и контролировать курицу — использовать конус для уничтожения, который иногда называют удерживающей воронкой.

Конус убийства — это контейнер конической формы, открытый с обоих концов. Отверстие в верхнем торце достаточно велико, чтобы сначала вставить куриную голову, чтобы она плотно удерживала курицу. Нижний конец достаточно открыт, чтобы выступать только голова и шея курицы. Конус для убийства плотно удерживает курицу, поэтому вам не нужно это делать, и помогает защитить вас от брызг. Это также позволяет собирать кровь всего стада для использования позже в саду в качестве кровяной муки. Как только курица помещается в конус, она успокаивается и не борется вообще.Иногда встречаются птицы, которые сопротивляются, но конус подходящего размера удерживает их на месте, предотвращая еще более неприятную сцену.

Вы можете создать конус убийства самостоятельно практически без затрат. Все, что вам нужно, это обрезок листового металла и несколько заклепок. Металлолом должен быть довольно легко найти.Его часто используют для изготовления водостоков и отделки металлических построек. Поставляется в больших рулонах шириной два фута. Обратитесь к местному установщику водосточных желобов или к строительному подрядчику, который строит металлические здания. Большинство из них будут рады избавить вас от следующей работы. Вы можете даже предложить ему дюжину свежих яиц или жареную птицу за его доброту. Вам понадобится всего лишь кусок длиной менее двух футов. Если вам действительно повезет, подрядчик разрешит вам прийти на стройплощадку, чтобы забрать лом, и позволит вам использовать свой металлический тормоз, чтобы облегчить работу.Если нет, все, что вам нужно, это пара ножниц.

Вы можете настроить размер конуса в соответствии с размером цыплят, которых вы выращиваете. Использование слишком большого конуса на маленькой птице позволит птице проскользнуть через нижнее отверстие. Вы будете удивлены, обнаружив, что четырех- или пятифунтовая фритюрница может проскользнуть через отверстие диаметром всего четыре дюйма. Я обнаружил это на собственном горьком опыте с первым построенным мною конусом. Из этого конуса теперь делают не меньше индейки. Я выращиваю крупную породу буйволовых орпингтонов, которые сопоставимы по размеру с большинством мясных птиц.Для птицы такого размера вам понадобится кусок металлического лома длиной около 16 дюймов. На листе металла нарисуйте трапециевидную форму конуса так, чтобы верхний край конуса имел длину 24 дюйма, а нижний край — 10 дюймов. Стороны должны быть около 16 дюймов в длину.

Надев перчатки, чтобы защитить руки от острых металлических краев, вырежьте узор на куске листового металла ножницами для жести.Чтобы предотвратить будущие порезы об острых краях при использовании конуса, загните примерно полдюйма верхней, нижней и одной стороны внутрь плоскогубцами и расплющите молотком. Этот шаг будет намного проще и чище, если вы используете металлический тормоз. Следующим шагом будет свертывание листового металла в форме конуса с перекрытием двух сторон примерно на полдюйма. Держите сторону с острыми краями внутрь конуса. Верхнее отверстие конуса должно быть около 9 дюймов в диаметре, а нижнее отверстие — не более 3 дюймов в диаметре.Просверлите 8 или 9 равномерно расположенных отверстий по обеим сторонам, где они перекрываются, вставьте и расправьте заклепку в каждом наборе отверстий так, чтобы две стороны скрепили вместе. Просверлите большое отверстие чуть ниже верхнего края в задней части конуса, чтобы повесить его на гвоздь в дереве или на доске. Петлю для подвешивания также можно сделать из другого небольшого куска металлолома, согнутого пополам и прикрепленного к спинке с помощью заклепки.

Теперь ваш конус убийства готов. Повесьте его на дереве так, чтобы верхушка была примерно на уровне плеч.Если вы собираете кровь для удобрения, поставьте под нее поддон или ведро. Сначала вставьте куриную голову и вытащите ее из нижнего отверстия. Чтобы прокачать курицу, возьмите очень острый нож и, держа курицу за голову, разрежьте горло с обеих сторон прямо под нижней челюстью. Не заходите достаточно глубоко, чтобы перерезать позвоночник. Цыпленок быстро истекает кровью, сливая кровь с мяса без особых усилий и беспорядка в течение всего процесса.

Аллен Истерли живет на ферме в горах Аллегейни недалеко от Баси, штат Вирджиния.С ним можно связаться через его веб-сайт.

Конус для уничтожения курицы — все, что вам нужно знать

Что такое конус для уничтожения курицы?

Конус для умерщвления цыплят — это инструмент или оборудование, используемое на предприятии по переработке куриного мяса для удержания зрелого цыпленка перед его оглушением и забоем. Его также можно было назвать сдерживающим конусом.

Важность конусов для умерщвления цыплят

1. Основная причина, по которой используются конусы для умерщвления цыплят, состоит в том, чтобы уберечь цыплят от ненужных болей и страданий, возникающих при разрезании яремной вены или отключении шеи.
2. Кроме того, это помогает удерживать птиц на месте и избегать прыжков обезглавленных цыплят и испорченных кровью повсюду.
3. Делает процесс убоя проще и быстрее.
4. Кровь курицы стекает быстрее.
5. Улучшает качество, нежность и вкус куриного мяса.

Конус для убийства фабричного или самодельного изготовления

Конечно, все, что сделано фабричным способом, зачастую лучше и лучше, чем самодельное.Однако цена произведенного на заводе всегда выше.

Если вы хотите купить фабричные конусы для убоя цыплят, вы, возможно, разоритесь, потому что они стоят дорого. Если у вас получится изготовить их самостоятельно, то вы сэкономите много денег. Фактически, если он хорошо построен, вы можете использовать конусы убийства в течение очень долгого времени.

Как построить конус для убийства цыплят

Построить конус для убийства цыплят — не сложная задача. Если у вас есть все необходимые материалы, изготовление собственного конуса дается легко и весело.Необходимые материалы:

• Пластиковые ведра
• Маркер для ручки
• Пила или нож
• Сверлильный станок
• Связующая проволока

Вы можете посмотреть это видео здесь, чтобы узнать, как сделать хороший конус для убоя цыплят

Как использовать конус для уничтожения цыплят

1. Использовать конус для уничтожения цыплят также просто. Вам нужно всего лишь взять птицу или курицу за две ножки и перевернуть вверх дном. Положите курицу в конус головой вниз.
2. Оглушите птицу, потяните за голову и перережьте шею острым ножом
3. Подождите, пока кровь стечет и убедитесь, что жизнь покинула птицу
4. Удалите птицу и продолжайте с оставшимися цыплятами или переходите к следующему этапу обработка.

Лучший конус для убоя цыплят на Афримаше

Конус для убоя цыплят на 12 птиц

Это сфабрикованный конус для убоя цыплят, изготовленный из нержавеющей стали. Следовательно, его легко чистить, и на нем не появляется ржавчина. Он также может вместить до 12 цыплят одновременно и отлично подходит для ручного и полуавтоматического завода по переработке цыплят.

Модель отслоения сетчатки у цыплят: Cone Rich и Novel

Аннотация

Фон

Разработка моделей отслоения сетчатки у мелких животных может быть сложной и дорогостоящей. Здесь мы создаем и характеризуем новую модель отслойки сетчатки с большим количеством конусов (RD) у цыплят.

Методология / основные выводы

Отслоения сетчатки были созданы у цыплят между 7 и 21 днями постнатального развития путем субретинальных инъекций физиологического раствора (SA) или гиалуроновой кислоты (HA).Инъекции проводили через расширенный зрачок под наблюдением под хирургическим микроскопом, используя второй глаз в качестве контроля. Иммуногистохимические анализы были выполнены на 1, 3, 7, 10 и 14 дни после отслоения сетчатки для оценки клеточных ответов фоторецепторов, глии Мюллера, микроглии и неастроцитарной внутренней глии сетчатки (NIRG). Клеточную пролиферацию выявляли включением бромдезоксиуридина (BrdU) и экспрессией ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA). Гибель клеток определяли с помощью мечения ник-концов терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы dUTP (TUNEL).Как и в моделях RD у млекопитающих, наблюдается укорочение внешних сегментов фоторецепторов и неправильная доставка опсинов фоторецепторов в области RD. Гибель фоторецепторных клеток была максимальной через 1 день после RD, но продолжалась до 14 дней после RD. Мюллерова глия активировала глиальный фибриллярный кислый белок (GFAP), пролиферировала, обнаружила межкинетическую ядерную миграцию и мигрировала в субретинальное пространство в областях отслоения. Микроглия стала реактивной; они активировали CD45, приобрели амебоидную морфологию и мигрировали к наружной сетчатке в областях RD.Реактивные клетки NIRG накапливались в отдельных областях.

Выводы / Значение

Субретинальные инъекции SA или HA в куриный глаз успешно вызвали отслоение сетчатки и клеточные ответы, аналогичные тем, которые наблюдаются на стандартных моделях млекопитающих. Учитывая относительно большой размер глаз и низкую стоимость, модель RD на цыплятах дает преимущества для высокопроизводительных исследований.

Образец цитирования: Cebulla CM, Zelinka CP, Scott MA, Lubow M, Bingham A, Rasiah S, et al.(2012) Модель отслойки сетчатки у цыплят: Cone Rich и Novel. PLoS ONE 7 (9): e44257. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0044257

Редактор: Альфред Левин, Университет Флориды, Соединенные Штаты Америки

Поступила: 15.04.2012; Одобрена: 31 июля 2012 г .; Опубликовано: 6 сентября 2012 г.

Авторские права: © Cebulla et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа была поддержана грантом № KL2RR025754 от Национального центра исследовательских ресурсов и стартовыми фондами факультета офтальмологии Университета штата Огайо. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Отслоение сетчатки (RD) является клинически важной причиной потери зрения; это обычное явление и разрушительно для зрения и самих глаз.Низкая острота зрения в результате РЗ изучается на моделях людей и животных на протяжении десятилетий [1]. Такие модели включают в себя интравитреальные инъекции диспазы для ферментативного разрушения базальных мембран [2], [3], [4], субретинальные инъекции физиологического раствора для создания транзиторной RD [5] или гиалуроновой кислоты для хронической RD [6], [7] или интравитреальная инъекция клеток (например, фибробластов, макрофагов, пигментных эпителиальных клеток сетчатки) [1], [8], [9], [10]. В настоящее время субретинальная инъекция гиалуроновой кислоты является распространенной моделью РЗ и помогла объяснить каскад событий, следующих за РД, которые могут привести к необратимой потере зрения [6].

Изменения фоторецепторов, глии и макрофагов / микроглии, по-видимому, имеют решающее значение в патобиологии РЗ. В частности, внешние сегменты фоторецепторов (OS) дегенерируют, и многие фоторецепторы апоптозируют, что приводит к истончению внешнего ядерного слоя (ONL) [11], [12]. Этот апоптоз максимален через 3 дня после отслоения сетчатки в нескольких моделях млекопитающих [13]. Вследствие повреждения фоторецепторов происходит пролиферация, гипертрофия глии Мюллера с повышением регуляции промежуточных филаментов [13], [14], [15], [16] и миграция во внешний ядерный слой (ONL) [17], [18] ], [19], [20], способствуя образованию деструктивного рубца, который является признаком пролиферативной витреоретинопатии [6], [21].Отростки Мюллера выходят за пределы внешней ограничивающей мембраны (OLM) и ограничивают повторный рост внешних сегментов фоторецепторов после повторного прикрепления сетчатки [18]. Кроме того, макрофаги и микроглия становятся реактивными и накапливаются в значительном количестве в сетчатке и субретинальном пространстве и вносят свой вклад в патофизиологию сетчатки после RD [19], [22], [23], [24], [25], [26]. , [27].

Для моделирования отслоения сетчатки и пролиферативной витреоретинопатии использовались самые разные виды млекопитающих, включая кроликов, кошек, мышей и приматов [13].Но, за исключением приматов, у этих видов нет сетчатки с большим количеством колбочек, необходимой для моделирования людей. Одно животное, которое действительно обладает подобной плотностью конусов, — это суслик ( Spermophilus beecheyi ), и оно использовалось в качестве модели для RD [28], [29]. К сожалению, у модели суслика есть существенные недостатки — плохая доступность и сложность в обращении. По этим практическим причинам идентификация более богатых колбочек животных моделей RD важна для изучения этого заболевания сетчатки.Кроме того, особую ценность будет иметь модель, которая позволит нам лучше понять молекулярную биологию макроглиальных и микроглиальных клеток и их ответы на повреждение сетчатки и клетки-предшественники [30], [31], [32], [33] , [34], [35], [36].

Цыпленок использовался для изучения развития зрительной системы [37], [38] и, в последнее время, для изучения повреждения сетчатки и ее способности к регенерации [30], [31], [32], [33], [34], [35], [36]. Это дневной вид со сложной визуальной системой, подчеркивающей цветовое зрение.Сетчатка цыпленка содержит четыре одиночных колбочки, отвечающих за цветовое зрение, и одну двойную колбочку, которая может опосредовать ахроматическое восприятие движения [39]. Типы колбочек включают те, которые выражают визуальные пигменты, чувствительные к длинным (L), средним (M) или коротким (S) длинам волн. По соглашению, пики поглощения фотопигмента L-колбочек цыплят при 517 нм (также известного как куриный красный), фотопигмента M2 конуса при 508 нм (куриный зеленый), фотопигмента M1 конуса при 455 нм (куриный синий) и фотопигмента S-конуса при 415 нм. (куриная фиалка, наиболее похожая на человеческие S-шишки) [40].Палочки содержат зрительный пигмент родопсин (поглощение около 500 нм) [40], [41]. Колбочек в сетчатке цыпленка больше, чем палочек на 6–1 [42], в то время как у человека палочек примерно в 20 раз больше, чем колбочек [43]. Колбочки распределены по всей сетчатке цыпленка с наибольшей плотностью в центральной области без стержней, которая аналогична центральной ямке у человека [38], [41].

Этим исследованием мы хотим повысить ценность использования цыплят в биологических исследованиях. Мы предлагаем разработать новую модель РЗ у цыплят с помощью субретинальной инъекции гиалуроновой кислоты.Мы надеемся использовать его многочисленные преимущества моделирования, в том числе (1) сетчатку с большим количеством колбочек, (2) новую глию сетчатки [присутствует у нечеловеческих приматов, но не у грызунов], (3) богатство данных о молекулярных ответах микро- и макроглии. к повреждению сетчатки и регенерации сетчатки, (4) доступность мутантных окулярных штаммов, (5) секвенированный геном, (6) низкая стоимость, (7) широкая доступность, (8) простота обращения и (9) большие глаза, доступные к экспериментальной манипуляции.

Результаты

Отслоения сетчатки и контрольная группа исследовались на 1, 3–4, 7, 9–10 и 14–16 дни.Первоначально РПЭ выглядел уплощенным на 1-й день с потерей апикальных отростков (Рис. 1a – c). Через 9 дней после обработки отслоившийся РПЭ имел бугорчатый вид (рис. 1d – f) с признаками гиперплазии в некоторых образцах (рис. 1c). Наружные сегменты фоторецепторов были короче и дегенерировали к 1-му дню по сравнению с контролем (рис. 1). Кроме того, мы наблюдали истончение внешнего ядерного слоя (ONL), что указывает на потерю фоторецепторов (рис. 1f). Отслоения солевого раствора разрешились к моменту времени 3 дня (не показано), в то время как отслоения гиалуроновой кислоты сохранялись.

Рис. 1. Измененная морфология наружной сетчатки при отслойке сетчатки у цыплят.

График окрашивания толуидиновым синим замороженных срезов отслоения сетчатки в дни 1, 3, 9, 10 и 14, демонстрирующий типичные дегенеративные изменения после HA RD, а также вариабельность образовавшихся отслоений. (а) Нормальная сетчатка с деталями внешней сетчатки, включая масляные капли (преимущественно оранжевые сферы) между внутренним и внешним сегментами фоторецептора и апикальные отростки РПЭ (вставка). (б – е) Наблюдается укорочение наружных сегментов и уплощение РПЭ в областях RD.Позже происходит уменьшение тел клеток во внешнем ядерном слое (f). Гиперплазия РПЭ отмечается на некоторых участках (В). ONL (внешний ядерный слой), OPL (внешний плексиформный слой), PR (фоторецептор), IS (внутренние сегменты), OS (внешние сегменты), RBC (красные кровяные тельца). Шкала шкалы (50 мкм).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0044257.g001

Иммуногистохимический анализ фоторецепторов показал неправильную транспортировку и дезорганизацию L / M-опсина, S-опсина и родопсина в областях отслоения сетчатки (рис. 2).Эти изменения были подобны как в физиологическом растворе (SA), так и в RD гиалуроновой кислоты (HA), даже несмотря на то, что SA RD исчезли к 3-му дню. Повторное распределение L / M опсина в теле фоторецепторной клетки было замечено с помощью конфокальной микроскопии. Опсин-иммунофлуоресценция присутствовала во внутренних сегментах, телах клеток и окончаниях аксонов стрессированных фоторецепторов в областях отслоения (Figs. 2j-l). Примерно на 9 день RD наблюдалось снижение уровней родопсина и опсина с относительным сохранением L / M опсина и кальбиндина (рис.2). Мечение для S opsin и rhodopsin было уменьшено в отделенных областях сетчатки, тогда как метки для L / M opsin и calbindin остались, но оказались дезорганизованными (Рисунок 2q – t).

Рис. 2. Неправильное размещение фоторецепторных опсинов в RD.

Кальбиндин (красный) и L / M опсин (зеленый) иммуноокрашивание в контрольной сетчатке необработанного парного глаза (a – c) и гиалуроновая кислота RD на 3 (d – f) и 9 (g – i) день. Обратите внимание на снижение интенсивности окрашивания L / M опсина на 9-й день HA RD. Конфокальная микроскопия демонстрирует раннее неправильное распределение L / M опсина (зеленый) с окрашиванием тела фоторецепторных клеток и ножек колбочек (стрелки, k, l) в SA RD на 3 день по сравнению с необработанными контролями.Окрашивание L / M опсина присутствует в областях, соответствующих IS / OS конуса, а также эллипсоидам колбочек в сетчатке нормального цыпленка (j). Некоторые транзитин-положительные глиальные отростки проходят под внешней ограничивающей мембраной (OLM, стрелка k, l). Подобно HA RD 3 дня, RD SA 3 дня показывают неправильную транспортировку родопсина (красный), L / M опсина (зеленый, m, n) и S opsin (зеленый, o, p), несмотря на рассасывание субретинальной жидкости. При продвинутой стадии HA RD (день 16 RD, q – t) происходит перераспределение L / M опсина и кальбиндина в теле клетки с потерей опсина и родопсина (скобка).ONL (внешний ядерный слой), OPL (внешний плексиформный слой), PRL (фоторецепторный слой). Шкала шкалы 50 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0044257.g002

Для оценки времени гибели фоторецепторов в этой модели был проведен TUNEL-анализ. Гибель клеток была значительно увеличена в отслоенной сетчатке (ANOVA, p = <0,0001, рисунок 3). Гибель клеток была максимальной на 1-й день после отслоения, а затем уменьшалась с течением времени (1-й день контроль: 1-й день RD (p <0,0001), 1-й день RD: 3-й день RD (p <0.0001), RD дня 1: RD дня 7 (p <0,0001) и RD дня 1: RD дня 14 (p = 0,0004)). Мечение TUNEL существенно не отличалось от контроля на 3, 7 и 14 день. Мечение проявляется в основном во внешнем ядерном слое (ONL), но некоторые клетки наблюдались в INL (данные не показаны). Толщина ONL, показатель выживаемости фоторецепторных клеток, не изменилась в первый день, но значительно снизилась в более поздние моменты времени после отслоения сетчатки, составляя 99% парного контроля на 1 день отслоения, 84% на 3 день, 55% на 7 день и 47% через 14 дней после отслоения сетчатки (рис.3, ANOVA; p = 0.0002). Средняя толщина ONL в областях отслоения была значительно меньше, чем в парном контроле на 14 день (p <0,0001) и пограничная на 7 день (p = 0,0088). Толщина ONL в RD 1-го дня была значительно больше по сравнению с 7-м и 14-м днями (p = 0,0005 и 0,0033, соответственно).

Рис. 3. Гибель фоторецепторных клеток у цыплят RD.

(a – f) Репрезентативные фотографии TUNEL-положительных клеток в контрольной сетчатке и в день 1, 3, 7, 9 и 14 HA RD. TUNEL-положительные клетки более распространены во внешнем ядерном слое сразу после отслоения.Желтыми линиями отмечены внутренняя и внешняя ограничивающие мембраны. (g) Количественная оценка TUNEL: скобка со звездочкой отмечает статистически значимые различия между контролем и днем ​​1 (p <0,0001), а также днем ​​1 и днем ​​3 (p <0,0001), днем ​​7 (p <0,0001) и днем. 14 (р = 0,0004). (h) Количественная оценка толщины внешнего ядерного слоя: скобка со звездочкой отмечает статистически значимые различия между днем ​​1 и днем ​​7 (p = 0,0005) и днем ​​14 (p = 0,0033). Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0044257.g003

Оценивали клеточные ответы глии Мюллера на RD. Подобно находкам на моделях млекопитающих, экспрессия GFAP промежуточных филаментов увеличивалась в областях отслоения (Рис. 4) уже через 3 дня после отсоединения. Экспрессия транзитина, птичьего гомолога нестина млекопитающих, была аналогичным образом увеличена (фиг. 4d). Глиальные отростки, положительные по GFAP, транзитину и глиальному маркеру Мюллера TOP _AP (топографический маркер, экспрессируемый вдоль передне-задней оси, обнаруживаемый антителом 2M6) [44], выходили за пределы внешней ограничивающей мембраны (OLM) в областях RD уже на 3-е сутки (рис.2, 4). Области, соответствующие субретинальному рубцу, были визуализированы на 7 и 14 день с большими скоплениями субретинальных глиальных отростков, а также клеточными телами, положительными по Sox2 и TOP _AP (рис. 4).

Фигура 4. Мюллерова глия, активированная у цыплят RD: экспрессия промежуточных филаментов GFAP (необработанные (а), день 5 HA RD (c)) и транзит, гомолог нестина цыплят (день 5 HA RD (d), необработанный, необработанный). показаны) по существу отрицательны в нормальной контрольной сетчатке и увеличиваются после RD к 3 дню (не показано).

GFAP- и транзитин-положительные глиальные отростки Мюллера проходят под внешней ограничивающей мембраной (OLM) в HA RDs (стрелки c, d) в субретинальное пространство. Маркер Мюллера TOP _AP (антитело 2M6) присутствует в основном в вертикальном распределении по всей необработанной сетчатке в глии Мюллера (b) и увеличивается, особенно во внешней сетчатке ниже OLM в HA RD, с сопутствующими волнообразными волнами на внешней сетчатке ( е). Клетки в субретинальных рубцах положительны на маркер-предшественник Мюллера Sox2 (стрелка, e) и 2M6 (стрелка, f).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0044257.g004

О пролиферации клеток, особенно мюллеровой глии, сообщалось после отслоения сетчатки на моделях млекопитающих [13], [45], [46]. На Фигуре 5 показаны пролиферирующие клетки, присутствующие в отслоенной сетчатке; большинство из них были Sox2 / PCNA-положительными Мюллерова глия (рис. 5). PCNA-положительные клетки были более многочисленны, чем BrdU-положительные клетки, и преимущественно совместно локализованы с Sox2, но не с маркером NIRG гомеобоксным белком Nkx-2.2 (Nkx2.2), что указывает на пролиферацию глии Мюллера (рис. 5). Мюллерглия также обнаруживает интеркинетическую миграцию ядер в областях отслоения с миграцией ядер во внешнюю сетчатку (Figs. 4-5).

Рис. 5. Пролиферация глии Мюллера после HA RD.

Иммуноокрашивание для обнаружения пролиферирующих клеток продемонстрировало больше PCNA (синий), чем BrdU (зеленый) положительных клеток в моменты времени, протестированные после RD (день 3, 7, 14). Sox2 (красный) маркирует ядра мюллеровой глии и клеток NIRG. Объединенные изображения PCNA, Sox2 и BrdU демонстрируют хорошую корреляцию PCNA и Sox2, в том числе в субретинальном рубце.Клетки, маркированные всеми тремя маркерами, отмечены стрелками, в то время как отрицательные клетки Sox2, маркированные PCNA и BrdU, отмечены открытыми стрелками.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0044257.g005

Сильно локализованная инфильтрация и активация сетчатки и субретинальной микроглии и макрофагов характерна для моделей RD у млекопитающих [22], [24], [25] . В глазах RD цыплят наблюдалось значительное накопление CD45-положительных микроглии / макрофагов в отслоенной сетчатке по сравнению с контролем (рис.6). Количественная оценка CD45-иммунофлуоресценции показала значительное увеличение средней площади сигнала на поле зрения с 2,8 × 10 ⁴ единиц относительной интенсивности в контрольной сетчатке до 25,0 × 10 ⁴ в сетчатке RD на 1 день (p = 0,0092), а также Сумма плотности CD45 увеличилась с 7,2 × 10 ⁵ до 64,2 × 10 ⁵ (p = 0,0165). Сумма плотностей была значительно увеличена в день 3 RD сетчатки при 59,0 × 10 ⁵ по сравнению с контролем 3 дня на 4,0 × 10 ⁵ (p = 0,0118), в другие дни не достигала значимости после коррекции Бонферрони.

Рис. 6. Повышенная регуляция микроглии у SA и HA RD цыплят.

SA RD (b) и HA RD (c) показывают повышенную регуляцию микроглиального маркера CD45 (зеленый) в областях RD по сравнению с контрольной сетчаткой (a). SA RD разрешается к 3-му дню. Микроглия приобретает амебоидную морфологию и мигрирует во внешнюю сетчатку / субретинальное пространство. Количественное определение окрашивания CD45 в HA RD с течением времени (d — сумма плотности и e — средняя площадь).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0044257.g006

Недавно новая популяция глиальных клеток (неастроцитарная внутренняя глия сетчатки (NIRG) была обнаружена в сетчатке многих видов животных, включая кур и приматов [ 34], [47] и особенно заметны после повреждения сетчатки в областях фокальной отслойки [34].Известно, что клетки NIRG экспрессируют Sox2, Sox9, Nkx2.2, транзитин и виментин, но отрицательны для GFAP и Pax2 [34]. Иммуноокрашивание клеток NIRG выявило накопление клеток NIRG выше фонового контроля в областях RD (рис. 7). К удивлению, клетки NIRG были обнаружены в субретинальных рубцах, а также на внутренней сетчатке.

Фигура 7. Клетки NIRG слегка повышают активность после HA RD цыпленка.

Клетки NIRG (стрелки) положительны для Nkx2.2 (зеленый, a – f) и Sox9 (оранжевый, c, d) и увеличиваются после HA RD по сравнению с контролем.Повышающая регуляция NIRGs меньше, чем мюллерова глия (Sox9 + / Nkx- клетки внутреннего ядерного слоя и внешней сетчатки). NIRG были идентифицированы в субретинальных рубцах (f, стрелка; зеленый = Nkx, синий = DAPI).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0044257.g007

Обсуждение

Насколько нам известно, это первое исследование, в котором цыпленок используется в качестве модели отслоения сетчатки. Система моделей цыплят с обогащением шишек имеет множество биологических, логистических и практических преимуществ.Вкратце, они предлагают преимущества в колбочках, глии, охарактеризованных ответах сетчатки, секвенированном геноме, доступности, низкой стоимости, простоте обращения и больших глазах. Хотя цыплят обычно не отбирают на основе генетического штамма, есть несколько доступных офтальмологических мутантов [см. Обзор [48]]. Поскольку глаз большой, инъекции в стекловидное тело могут быть легко выполнены для потенциально высокопроизводительного анализа терапевтических агентов.

Цыпленок выгодно отличается от суслика доступностью, обращаемостью и стоимостью.Шишки цыпленка и суслика имеют сходство, но есть некоторые отличия (табл. 1). Сетчатка цыпленка служит тетрахроматическому зрению и содержит четыре одиночных колбочки (L, M1, M2 и S чувствительные) и одну двойную колбочку [39]. У сусликов дихроматическое зрение с колбочками, наиболее чувствительными к длинам волн M (518 нм) и S (436 нм), по данным тестирования ERG [49]. Как и птенцы, суслики также ведут дневной образ жизни с очень высокой плотностью колбочек: около 7,5 миллионов колбочек на сетчатку. Это в 1,6 раза больше плотности человеческого конуса (4.6 миллионов конусов) [50]. У них есть сетчатка, в которой 85% фоторецепторов представляют собой колбочки, около 5,7 колбочек на стержень [29]. Для сравнения: у цыплят по 6 шишек на стержень [42]. Самая высокая плотность колбочек у суслика (49,550 / мм ² ) находится в зрительной полосе, аналогичной центральной ямке, в горизонтальной полосе сетчатки на 2 мм вентральнее головки зрительного нерва [51]. Для сравнения: центральная область цыпленка имеет 10 000–16 000 колбочек / мм2, хотя средняя плотность конусов выше в других исследованиях [52].В отличие от шишек млекопитающих, куриные шишки содержат каплю масла, которая отфильтровывает свет с длинами волн ниже 575, 520, 497 или 454 нм [39], [53]. Куриные стержни не содержат капли масла.

Несмотря на некоторые различия в структуре их колбочек по сравнению с млекопитающими, куриные колбочки показали сходную реакцию на отслоение сетчатки. Наружные сегменты фоторецепторов демонстрировали аномалии в отслоившихся областях уже через сутки после отслойки. Произошла неправильная транспортировка фоторецепторных опсинов и родопсина, аналогичная той, что используется в других моделях отслоения [28], [54], [55], [56], [57].Опсины конуса перераспределялись в плазматическую мембрану по мере дегенерации внешних сегментов. Подобно Sethi et al. [16], мы обнаружили перераспределение L / M опсина в теле клетки в сетчатке с более тяжелой дегенерацией в HA RDs. Мы также наблюдали окрашивание L / M опсина на теле фоторецепторных клеток и ножках колбочек в повторно прикрепленных глазах SA RD на 3 день.

Сетчатку суслика оценивали с помощью гистологических, молекулярных и электрофизиологических методов для определения реакции палочки и колбочки на RD.Как и у других видов млекопитающих, дегенерация наружного сегмента начинается в 1 день. Rex et al. [56], [57] продемонстрировали резкую потерю экспрессии мРНК и белков конусных опсинов в начале после RD (дни 1-3) с относительным сохранением экспрессии палочкообразного опсина. Наши исследования указывают на более длительное удержание маркеров колбочек в модели RD цыплят с некоторым окрашиванием L / M опсином и кальбиндином, обнаруживаемым на 14-й день RD. Тем не менее, мы отмечаем, что S opsin-позитивные колбочки демонстрировали крайнее подавление этих S-фотопигментов в областях тяжелой дегенерации, предполагая, что S-колбочки могут быть более чувствительными к повреждению от RD.Норк и др. [58] продемонстрировали значительное повреждение S-колбочек в RDs человека. Экспериментальные исследования RD дали неоднозначные результаты относительно того, являются ли S-колбочки более чувствительными к повреждению RD. Чтобы ответить на этот вопрос об относительной чувствительности к стрессу, необходимо провести дальнейшие исследования картирования S-конуса с помощью модели RD цыплят.

Хотя после RD происходит необратимая потеря некоторых фоторецепторов, исследования повторного прикрепления продемонстрировали восстановление палочек и колбочек, включая повторную экспрессию опсина колбочек [56], [57].Sakai продемонстрировал аналогичное временное истощение опсинов S и M колбочек в сетчатке сусликов, которые были отсоединены в течение 1 дня, а затем снова прикреплены [59]. Клинически и экспериментально важно, чтобы динамика клеточной гибели фоторецепторов после RD была аналогична модели цыпленка и сетчатке человека. Умирающие клетки были наиболее многочисленны на 1-й день. Это раньше, чем пик гибели клеток на 3-й день, наблюдаемый в нескольких моделях RD млекопитающих [6]. Количество умирающих клеток сильно варьировалось между людьми, вероятно, из-за того, что размер отряда был различным.Однако толщина внешнего ядерного слоя, отражающая гибель фоторецепторных клеток, изначально сохранялась и не уменьшалась значительно до 7-14 дней после отслоения. Эти данные хорошо согласуются с данными человека, предполагающими, что интервал 7–30 дней после отслоения, вероятно, будет наиболее значимым для потери зрения из-за повреждения фоторецепторов [60], [61], [62], [63], [64] , [65]. Механизм потери зрения у пациентов с РЗ, поражающей макулу, сильно коррелирует как с гибелью фоторецепторных клеток (на что указывает истончение внешнего ядерного слоя), так и с аномалиями в наружных сегментах фоторецепторов (на что указывает разрыв «промежуточной линии») на спектральная оптическая когерентная томография (SD-OCT) [66].Это нарушение может улучшиться у пациентов со временем и согласуется с улучшением остроты зрения [66]. Будущие исследования на цыплятах, включая использование SD-OCT, будут полезны для более точной оценки восстановления фоторецепторов после восстановления отслоения сетчатки. Здесь в большинстве экспериментов использовалась субретинальная гиалуроновая кислота, которая вызывала хроническую отслойку. В солевых RD отслоения рассосались к 3 дню. Однако в этих повторно прикрепленных солевых RD реакции были аналогичны реакциям RD гиалуроновой кислоты, включая неправильный трафик фоторецепторных белков (рис.2k – l, m – p) и активация и миграция микроглии в субретинальное пространство (Fig. 6b).

Существует местный ответ Мюллерова глии в большинстве моделей RD у млекопитающих, а также в образцах ретинэктомии человека [6], [16]. Напротив, глия Мюллера у сусликов нереактивна в областях RD [28]. Это важная исследовательская обязанность. Модель RD цыпленка лучше подходит для RD кошек и человека, чем у суслика в своей выдающейся активации глии Мюллера, включающей повышающую регуляцию GFAP, дистальную миграцию и пролиферацию.Подобно этим другим моделям, процессы Мюллера выходят за пределы OLM и, по-видимому, создают субретинальные рубцы на некоторых глазах. Недавно было показано, что глия Мюллера пролиферирует, расширяет отростки и мигрирует под сетчатку с образованием субретинальных рубцов [21]. Сходным образом на модели цыпленка мы наблюдали пролиферацию мюллеровской глии и интеркинетическую ядерную миграцию с перемещением к внешней сетчатке и распространением процессов за пределы OLM. Гистологическое исследование субретинального рубца у цыпленка указывает на скопление глиальных отростков Мюллера и клеточных тел.Эти результаты подтверждают, что некоторые клетки-предшественники Мюллера отделяются и полностью мигрируют в субретинальное пространство, тогда как некоторые вырастают отростки только в субретинальное пространство. Такие модели и механизмы миграции имеют особое значение для трансляционных исследований. Контроль активации глии Мюллера и глиоза может иметь решающее значение для купирования субретинальных рубцов и пролиферативной витреоретинопатии.

Сетчатка курицы содержит недавно идентифицированный особый тип глиальных клеток, называемый неастроцитарной внутренней глией сетчатки (NIRG).NIRG-подобные клетки были идентифицированы в сетчатке многих видов, включая собак и обезьян, но не в сетчатке грызунов [34], [47]. NIRG активируются и пролиферируют в ответ на химическое повреждение сетчатки с помощью NMDA и IGF-1 у цыплят, что приводит к множественным небольшим отслоениям сетчатки [34]. В этих отделенных областях мюллерова глия отсутствует, но скопления клеток NIRG граничат с мюллеровской глией вокруг поврежденных участков внутренней сетчатки, витреад до того места, где обычно находится мюллерглия [34].Мало что известно о функции клеток NIRG в ответ на повреждение сетчатки. Чтобы определить, были ли клетки NIRG заметными в модели RD, созданной здесь, мы оценили популяции NIRG в отдельных областях. Эти исследования продемонстрировали небольшое увеличение количества клеток NIRG во внутренней сетчатке. Однако Nkx2.2-негативная мюллерова глия, экспрессирующая Sox2 и Sox9, была преобладающим типом глиальных клеток в отслоенной сетчатке в этой модели. Неожиданно некоторые клетки NIRG были обнаружены в субретинальных рубцах вместе с клетками, происходящими из Мюллер-глии (отрицательными для Nkx и положительными для Sox-9, а также Sox-2 и TOP _AP ).Эти исследования подтверждают мнение, что клетки макроглии вносят вклад в формирование субретинальных рубцов после отслоения сетчатки [21].

Подобно другим исследованиям на моделях млекопитающих, реакция макрофагов / микроглии на RD у цыплят впечатляет. Микроглия — это резидентные тканевые макрофаги ЦНС. В курином глазу их идентифицируют с помощью иммуноокрашивания на CD45 [67]. В необработанных глазах покоящаяся микроглия обычно располагается в плексиформных слоях сетчатки. После RD микроглия мигрирует во внешнюю сетчатку, активирует уровни CD45, приобретает амебоидную морфологию и проникает в субретинальное пространство.Накадзава и др. [22] определили важность макрофагального продукта MCP-1 в снижении выживаемости фоторецепторов на мышиной модели RD. Хотя у цыплят нет известного гомолога MCP-1, будет полезно определить, могут ли другие специфические продукты макрофагов снижать выживаемость фоторецепторов, аналогично таковым в моделях млекопитающих [22], и есть ли роль микроглии, способствующей развитию глии Мюллера. разрастание и образование субретинального рубца.

В заключение, модель RD у цыплят имеет много общего с моделью человека и преимущества перед другими моделями млекопитающих.Это модель с большим количеством колбочек, удобная для исследований, и она может предложить дополнительные сведения о патобиологии отслоения сетчатки. Это может быть полезно для высокопроизводительных исследований нейропротекторных или антипролиферативных агентов, которые улучшили бы РЗ.

Материалы и методы

Животные

цыплят Ливорно ( Gallus gallus domesticus ) были получены из Департамента зоотехники Университета штата Огайо. Их использовали в постнатальный период с 7 по 21 день (P7 – P21) для создания модели отслоения сетчатки в соответствии с протоколом, одобренным IACUC (№ 2009A0139).Лечили только один глаз. Цыплят содержали со свободным доступом к закваске Purina и воде с 12-часовым циклом от света до темноты в брудере из нержавеющей стали.

Хирургия отслойки сетчатки

Это исследование соответствует принципам Заявления ARVO об использовании животных в офтальмологических исследованиях и исследованиях зрения. Цыплят (P7–21) анестезировали ингаляционным изофлуораном через маску без дыхания. Расширение зрачка было достигнуто с помощью нескольких приемов капель тубокурарина гидрохлорида (Sigma: 6.7 мг / мл в физиологическом растворе с 0,1% бензалконием). Тубокурарин, нервно-мышечный блокирующий агент, который является конкурентным антагонистом никотиновых нейромышечных рецепторов ацетилхолина [68], был использован для расширения, поскольку радужная оболочка кур содержит преобладающие никотиновые холинергические рецепторы [69].

Левые глаза были обработаны тампоном с бетадином, и было вставлено педиатрическое зеркало для век. Боковая кантотомия была сделана стерильным лезвием бритвы для лучшего обнажения глазного яблока. Конъюнктива была стабилизирована 0.12 щипцов, а затем был временно рассечен кончиком иглы 25 г для обнажения склеры. Иглу 25 г на шприце объемом 5 см3 вводили примерно на 3 мм кзади от лимба, и стекловидное тело отсасывали из центральной полости стекловидного тела до тех пор, пока глаз не слегка смягчился. Затем через это отверстие выполнялась субретинальная инъекция с помощью специальной иглы с тупым кончиком 30 г на шприце Hamilton (Hamilton Company, Reno, NV) путем осторожного введения кончика иглы в центральную сетчатку. Наконечник визуализировали через зрачок с помощью операционного микроскопа, в то время как роговица была покрыта покровным стеклом и гелем Genteal.Субретинальные инъекции приблизительно 25 микролитров стерильного физиологического раствора (n = 3) или неразбавленной гиалуроновой кислоты (Healon, 10 мг / мл; AMO, Санта-Ана, Калифорния; n = 32) были доставлены в левый глаз для увеличения объема сетчатки. В конце процедуры глаз обрабатывали офтальмологической мазью с эритромицином. Глаза были энуклеированы для анализа на 1 день (n = 7), 3–4 (n = 10), 5–7 (n = 6), 9–10 (n = 3) и 14–16 (n = 6). .

Энуклеация и гистология

Животных умерщвляли вдыханием газа CO ₂ с последующей индукцией пневмоторакса.Энуклеацию выполняли путем отсечения периокулярной ткани и мышц, прикрепленных к глазному яблоку, с помощью щипцов и ножниц Wescott и рассечения зрительного нерва. Глобус был обработан, зафиксирован и разрезан, как описано ранее [70]. Лезвие бритвы использовалось для удаления переднего колпачка. Глаз помещали в фиксатор, содержащий фосфатный буфер с 4% параформальдегида и 3% сахарозы в 0,1 М фосфатном буфере при pH 7,4 на 30 минут. Глаза дважды промывали PBS в течение 10 минут и помещали в 30% сахарозу в PBS на ночь.Глаза помещали в раствор OCT (оптимальная температура резки, электронная микроскопия) и мгновенно замораживали. Срезы последовательно вырезали по 12 микрон в области RD для гистологического анализа.

BrdU Маркировка

Интравитреальные инъекции 2 мкг 5-бром-20-дезоксиурдина (BrdU; 100 мкг / мл; Sigma-Aldrich) были сделаны примерно за 4 часа до эвтаназии (n = 4 цыпленка в каждый момент времени: день 1, 3, 7, 14). ), как описано ранее [36]. Замороженные срезы иммуноокрашивали с использованием антитела против BrdU (G3G4, банк гибридом исследований развития).BrdU-положительные клетки определяли на разных уровнях в области отслоения сетчатки для определения количества пролиферирующих клеток.

Тест TUNEL

оценивали с помощью анализа TUNEL с набором In situ Cell Death Kit (TMR красный; 1215679910, Roche Applied Science) в соответствии с инструкциями производителя.

Иммуногистохимия

Иммуногистохимия была проведена для обнаружения маркеров, как описано ранее [34]. Антитела к родопсину (Rho 4D2, мышь, щедрый подарок Dr.R. Molday, Университет Британской Колумбии), L / M opsin (AB5405, кролик, Chemicon), S opsin (кроличий поликлональный анти-голубой опсин, Millipore) использовали для оценки фоторецепторных опсинов. Мышиный антикальбиндин (300; Swant Immunochemicals, Беллинцона, Швейцария) использовали для обнаружения фоторецептора кальбиндина. Антитела к BrdU (G3G4, мышь, банк гибридом исследований развития) и PCNA (M0879, мышь, DAKO) использовали в качестве маркеров пролиферирующих клеток. CD45 (HIS-C7, мышь, Cedi Diagnostic) был маркером микроглии / макрофагов [67], GFAP (Z0334, кролик, Dako) и виментин (H5, мышь, DSHB) были маркерами мюллеровой глии.Sox-2 (Y-17, коза, Санта-Крус), Sox-9 (AB5535, кролик, Chemicon) и транзитин (EAP3, мышь, банк гибридных исследований развития) использовали для идентификации клеток NIRG и мюллеровой глии. DRAQ-5 (Biostauts Limited) использовали в качестве контркрашивающего средства для ядер для определения толщины внешнего ядерного слоя.

Анализ изображений

Микрофотографии были получены с использованием флуоресцентного микроскопа Leica DM5000B и цифровой камеры Leica DC500. Конфокальные изображения были получены с использованием Zeiss LSM 510 в Hunt-Curtis Imaging Facility.Анализ изображений был описан ранее [34]. Изображения были оптимизированы по цвету, яркости и контрасту, а изображения с двойной меткой наложены с помощью Adobe PhotoshopTM 6.0. Подсчет клеток производился, по крайней мере, у трех разных животных в зоне максимального отрыва, а средние значения и стандартные отклонения рассчитывались на основе наборов данных. Чтобы свести к минимуму вариабельность региональных различий в сетчатке, подсчет клеток производился из одной и той же области сетчатки для контрольных областей и областей отслоения сетчатки. Иммунофлуоресценцию количественно оценивали с помощью Image-Pro 6.2. Идентичное освещение, настройки микроскопа и камеры использовались для получения изображений для количественной оценки. Фиксированные области были взяты из цифровых изображений с разрешением 5,4 мегапикселя. Эти области были случайным образом взяты из всех слоев сетчатки в областях отслоения или аналогичных контрольных областях сетчатки. Для окрашивания CD45 в качестве интересующей области была выбрана сетчатка из 20-кратного поля зрения размером 376 441 мкм ² . Общую площадь иммунофлуоресценции CD45 сетчатки рассчитывали для областей с интенсивностью пикселей выше определенного порога и усредняли для каждой группы.Средняя плотность рассчитывалась как среднее значение пикселя выше порога в областях, обозначенных порогом. Сумма плотности рассчитывалась как сумма значений пикселей для всех пикселей в пределах областей, обозначенных порогом. Для измерений TUNEL количество иммунофлуоресцентных клеток выше порогового значения определяли для областей с интенсивностью пикселей выше определенного порогового значения с помощью Image-Pro 6.2. Для измерения толщины внешнего ядерного слоя Image-Pro 6.2 использовался для измерения высоты внешнего ядерного слоя путем усреднения равномерно распределенных измерений, выполненных в 20-кратном поле [71].Эти расчеты были выполнены для регионов, отобранных по крайней мере от трех разных индивидуумов для каждого экспериментального условия.

Статистический анализ

Чтобы определить, были ли существенными различия в толщине внешнего ядерного слоя, TUNEL-положительных клетках и микроглии в отслоенной сетчатке в разные моменты времени, сначала был проведен дисперсионный анализ (ANOVA), чтобы подтвердить разницу в измерениях с p <0,05, считающуюся значимой. Последующее тестирование методом наименьших квадратов с поправкой Бонферрони было выполнено (p <0.007 считался значимым при 7 условиях, сравниваемых для толщины ONL и TUNEL, и p <0,0125 для анализа микроглии с 4 сравниваемыми условиями (RD с контролями)). Для анализа использовали SAS v9.2 от SAS Institute Inc. (Кэри, Северная Каролина).

Благодарности

Антитело к родопсину (Rho 4D2) было щедрым подарком доктору Р. Молдею, Университет Британской Колумбии. Антитело к BrdU (G3G4) было разработано S.J. Кауфман и антитело к транзитину (клон EAP3) были разработаны Г.Дж. Коул; оба антитела были получены Банком гибридом исследований развития, разработанным под эгидой NICHD и поддерживаемым Биологическим факультетом Университета Айовы, Айова-Сити, Айова 52242. Мы благодарим Бонгсу Кима за полезную техническую помощь.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: CMC AJF. Проведены эксперименты: CMC CPZ MAS AB SR AJF. Проанализированы данные: CMC CPZ SR AM AJF. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты для анализа: CMC AJF.Написал статью: CMC AJF. Критическая редакция рукописи: М.Л.

Ссылки

1. 1. Agrawal RN, He S, Spee C, Cui JZ, Ryan SJ и др. (2007) Модели пролиферативной витреоретинопатии in vivo. Nat Protoc 2: 67–77.
2. 2. Мандава Н., Блэкберн П., Пол Д.Б., Уилсон М.В., Рид С.Б. и др. (2002) Рибозим к ядерному антигену пролиферирующих клеток для лечения пролиферативной витреоретинопатии. Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 43: 3338–3348.
3. 3. Schiff WM, Hwang JC, Ober MD, Olson JL, Dhrami-Gavazi E, et al.(2007) Оценка безопасности и эффективности химерного рибозима по отношению к ядерному антигену пролиферирующих клеток для предотвращения рецидива пролиферативной витреоретинопатии. Arch Ophthalmol 125: 1161–1167.
4. 4. Ирибарн М., Огава Л., Торбидони В., Доддс С.М., Доддс Р.А. и др. (2008) Блокада эндотелинергических рецепторов предотвращает развитие пролиферативной витреоретинопатии у мышей. Am J Pathol 172: 1030–1042.
5. 5. Луна Дж., Кьеллстрем С., Верардо М.Р., Льюис Г.П., Бьюн Дж. И др.(2009) Влияние временной отслойки сетчатки на размер полости и глиальное и нервное ремоделирование на мышиной модели Х-сцепленного ретиношизиса. Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 50: 3977–3984.
6. 6. Фишер С.К., Льюис Г.П., Линберг К.А., Верардо М.Р. (2005) Клеточное ремоделирование в сетчатке млекопитающих: результаты исследований экспериментальной отслойки сетчатки. Prog Retin Eye Res 24: 395–431.
7. 7. Накадзава Т., Такеда М., Льюис Г.П., Чо К.С., Цзяо Дж. И др. (2007) Ослабление глиальных реакций и дегенерация фоторецепторов после отслоения сетчатки у мышей с дефицитом глиального фибриллярного кислого белка и виментина.Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 48: 2760–2768.
8. 8. Лей Х., Ховланд П., Велес Г., Харан А., Гилбертсон Д. и др. (2007) Возможная роль PDGF-C в экспериментальной и клинической пролиферативной витреоретинопатии. Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 48: 2335–2342.
9. 9. Hui YN, Goodnight R, Sorgente N, Ryan SJ (1989) Фиброваскулярная пролиферация и отслоение сетчатки после интравитреальной инъекции активированных макрофагов в глаз кролика. Am J Ophthalmol 108: 176–184.
10. 10.Эндрюс А., Бальчунайте Э., Леонг Флорида, Талльквист М., Сориано П. и др. (1999) Фактор роста, полученный из тромбоцитов, играет ключевую роль в пролиферативной витреоретинопатии. Инвестируйте офтальмол Vis Sci 40: 2683–2689.
11. 11. Кук Б., Льюис Г.П., Фишер С.К., Адлер Р. (1995) Апоптотическая дегенерация фоторецепторов при экспериментальной отслойке сетчатки. Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 36: 990–996.
12. 12. Chang CJ, Lai WW, Edward DP, Tso MO (1995) Апоптотическая смерть фоторецепторных клеток после травматической отслойки сетчатки у людей.Arch Ophthalmol 113: 880–886.
13. 13. Fisher SK, Lewis GP (2003) Клетки Мюллера и ремоделирование нейронов при отслоении и повторном прикреплении сетчатки и их потенциальные последствия для восстановления зрения: обзор и пересмотр последних данных. Видение Res 43: 887–897.
14. 14. Lewis GP, Fisher SK (2003) Повышающая регуляция глиального фибриллярного кислого белка в ответ на повреждение сетчатки: его потенциальная роль в ремоделировании глии и сравнение с экспрессией виментина.Int Rev Cytol 230: 263–290.
15. 15. Lewis GP, Guerin CJ, Anderson DH, Matsumoto B, Fisher SK (1994) Быстрые изменения в экспрессии белков глиальных клеток, вызванные экспериментальным отслоением сетчатки. Am J Ophthalmol 118: 368–376.
16. 16. Сетхи С.С., Льюис Г.П., Фишер С.К., Лейтнер В.П., Манн Д.Л. и др. (2005) Ремоделирование глии и нейропластичность при отслойке сетчатки у человека с пролиферативной витреоретинопатией. Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 46: 329–342.
17. 17.Kroll AJ, Machemer R (1968) Экспериментальная отслойка сетчатки у совы-обезьяны. 3. Электронная микроскопия сетчатки и пигментного эпителия. Am J Ophthalmol 66: 410–427.
18. 18. Андерсон Д.Х., Герен С.Дж., Эриксон П.А., Стерн У.Х., Фишер С.К. (1986) Морфологическое восстановление повторно прикрепленной сетчатки. Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 27: 168–183.
19. 19. Андерсон Д.Х., Стерн У.Х., Фишер С.К., Эриксон П.А., Боргула Г.А. (1983) Отслоение сетчатки у кошки: интерфейс пигментного эпителия-фоторецептора.Инвестируйте офтальмол Vis Sci 24: 906–926.
20. 20. Эриксон П.А., Фишер С.К., Андерсон Д.Х., Стерн У.Х., Боргула Г.А. (1983) Отслоение сетчатки у кошки: внешний ядерный и внешний плексиформные слои. Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 24: 927–942.
21. 21. Lewis GP, Chapin EA, Luna G, Linberg KA, Fisher SK (2010) Судьба глии Мюллера после экспериментальной отслоения сетчатки: миграция ядер, деление клеток и образование субретинального глиального рубца. Мол Вис 16: 1361–1372.
22. 22. Накадзава Т., Хисатоми Т., Накадзава С., Нода К., Маруяма К. и др. (2007) Моноцитарный хемоаттрактантный белок 1 опосредует апоптоз фоторецепторов, вызванный отслоением сетчатки. Proc Natl Acad Sci U S A 104: 2425–2430.
23. 23. Льюис Г.П., Сетхи С.С., Картер К.М., Чартерис Д.Г., Фишер С.К. (2005) Активация микроглиальных клеток после отслоения сетчатки: сравнение между видами. Мол. Вис 11: 491–500.
24. 24. Хисатоми Т., Сакамото Т., Сонода К.Х., Цуцуми К., Цяо Н. и др.(2003) Клиренс апоптотических фоторецепторов: устранение апоптотических остатков в субретинальном пространстве и макрофагально-опосредованный фагоцитоз через рецептор фосфатидилсерина и интегрин alphavbeta3. Am J Pathol 162: 1869–1879.
25. 25. Канеко Х., Нишигучи К.М., Накамура М., Качи С., Терасаки Х. (2008) Характеристики микроглии костного мозга в нормальной и поврежденной сетчатке. Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 49: 4162–4168.
26. 26. Верардо М.Р., Льюис Г.П., Такеда М., Линберг К.А., Бьюн Дж. И др.(2008) Аномальная реактивность клеток Мюллера после отслоения сетчатки у мышей с дефицитом GFAP и виментина. Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 49: 3659–3665.
27. 27. Lewis GP, Charteris DG, Sethi CS, Fisher SK (2002) Животные модели отслоения и повторного прикрепления сетчатки: определение клеточных событий, которые могут повлиять на восстановление зрения. Глаз 16: 375–387.
28. 28. Линберг К.А., Сакаи Т., Льюис Г.П., Фишер С.К. (2002) Экспериментальная отслойка сетчатки в сетчатке суслика с доминированием конуса: морфология и базовая иммуноцитохимия.Vis Neurosci 19: 603–619.
29. 29. Jacobs GH, Calderone JB, Sakai T., Lewis GP, Fisher SK (2002) Модель на животных для изучения функции колбочек при отслоении сетчатки. Док офтальмол 104: 119–132.
30. 30. Fischer AJ, Bongini R (2010) Превращение мюллеровской глии в нейрональных предшественников в сетчатке. Мол нейробиол 42: 199–209.
31. 31. Fischer AJ, Bongini R, Bastaki N, Sherwood P (2011) Созревание фоторецепторов в сетчатке птиц стимулируется гормоном щитовидной железы.Неврология 178: 250–260.
32. 32. Фишер А.Дж., Омар Дж., Юбэнкс Дж., Макгуайр С.Р., Диркс Б.Д. и др. (2004) Различные аспекты глиоза в мюллеровской глии сетчатки могут быть индуцированы CNTF, инсулином и FGF2 в отсутствие повреждений. Молекулярное зрение 10: 973–986.
33. 33. Fischer AJ, Schmidt M, Omar G, Reh TA (2004) BMP4 и CNTF являются нейрозащитными и подавляют индуцированную повреждениями пролиферацию глии Мюллера в сетчатке. Молекулярная и клеточная нейробиология 27: 531–542.
34. 34. Fischer AJ, Scott MA, Zelinka C, Sherwood P (2010) Новый тип глиальных клеток в сетчатке стимулируется инсулиноподобным фактором роста 1 и может усугублять повреждение нейронов и глии Мюллера. Glia 58: 633–649.
35. 35. Фишер А.Дж., Скорупа Д., Шонберг Д.Л., Уолтон Н.А. (2006) Характеристика глюкагон-экспрессирующих нейронов в сетчатке курицы. J Comp Neurol 496: 479–494.
36. 36. Ghai K, Zelinka C, Fischer AJ (2010) Передача сигналов Notch влияет на нейропротекторные и пролиферативные свойства зрелой глии Мюллера.J Neurosci 30: 3101–3112.
37. 37. Мей Дж, Танос С. (2000) Развитие зрительной системы цыпленка. I. Дифференцировка клеток и гистогенез. Brain Res Brain Res Rev 32: 343–379.
38. 38. Танос С., Мей Дж. (2001) Развитие зрительной системы цыпленка. II. Механизмы аксонального наведения. Brain Res Brain Res Rev 35: 205–245.
39. 39. Kram YA, Mantey S, Corbo JC (2010) Фоторецепторы птичьих колбочек размещают сетчатку в виде пяти независимых, самоорганизующихся мозаик.PLoS One 5: e8992.
40. 40. Окано Т., Кодзима Д., Фукада Ю., Шичида Ю., Йошизава Т. (1992) Первичные структуры зрительных пигментов куриных шишек: родопсины позвоночных произошли из зрительных пигментов конусов. Proc Natl Acad Sci U S A 89: 5932–5936.
41. 41. Bruhn SL, Cepko CL (1996) Развитие паттерна фоторецепторов в сетчатке курицы. J Neurosci 16: 1430–1439.
42. 42. Моррис В.Б. (1970) Симметрия мозаики рецепторов, продемонстрированная у цыплят по частотам, расстоянию и расположению типов рецепторов сетчатки.J Comp Neurol 140: 359–398.
43. 43. Curcio CA, Sloan KR, Kalina RE, Hendrickson AE (1990) Топография фоторецепторов человека. J Comp Neurol 292: 497–523.
44. 44. Ochrietor JD, Moroz TP, Linser PJ (2010) Антиген 2M6 представляет собой специфичный для клеток Мюллера связанный с внутриклеточной мембраной белок семейства белков, связанных с сарколеммальной мембраной, а также TopAP. Мол Вис 16: 961–969.
45. 45. Fisher SK, Erickson PA, Lewis GP, Anderson DH (1991) Интраретинальная пролиферация, вызванная отслоением сетчатки.Инвестируйте офтальмол Vis Sci 32: 1739–1748.
46. 46. Геллер С.Ф., Льюис Г.П., Андерсон Д.Х., Фишер С.К. (1995) Использование антитела MIB-1 для обнаружения пролиферирующих клеток в сетчатке. Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 36: 737–744.
47. 47. Фишер А.Дж., Зелинка С., Скотт М.А. (2010) Неоднородность глии в сетчатке и зрительном нерве птиц и млекопитающих. PLoS One 5: e10774.
48. 48. Берт Д.В. (2007) Возникновение курицы как модельного организма: значение для сельского хозяйства и биологии.Poult Sci 86: 1460–1471.
49. 49. Джеральд Х. Якобс, Джей Нейтц, Крогнал М. (1985) Спектральная чувствительность конусов сусликов, измеренная с помощью мерцательной фотометрии ERG. J Comp Physiol A 156: 503–509.
50. 50. Curcio CA, Allen KA (1990) Топография ганглиозных клеток сетчатки глаза человека. J Comp Neurol 300: 5–25.
51. 51. Kryger Z, Galli-Resta L, Jacobs GH, Reese BE (1998) Топография фоторецепторов палочки и колбочки в сетчатке суслика.Vis Neurosci 15: 685–691.
52. 52. Хедингтон К., Чой С.С., Никла Д., Добл Н. (2011) Визуализация отдельных клеток сетчатки курицы с адаптивной оптикой. Curr Eye Res 36: 947–957.
53. 53. Bowmaker JK, Knowles A (1977) Визуальные пигменты и масляные капли сетчатки курицы. Видение Res 17: 755–764.
54. 54. Lewis GP, Erickson PA, Anderson DH, Fisher SK (1991) Распределение опсина и включение белка в фоторецепторы после экспериментального отслоения сетчатки.Exp Eye Res 53: 629–640.
55. 55. Fariss RN, Molday RS, Fisher SK, Matsumoto B (1997) Доказательства нормальных и дегенерирующих фоторецепторов о том, что два интегральных мембранных белка внешнего сегмента имеют отдельные транспортные пути. J Comp Neurol 387: 148–156.
56. 56. Рекс Т.С., Фарисс Р.Н., Льюис Г.П., Линберг К.А., Сокал И. и др. (2002) Обзор молекулярной экспрессии фоторецепторов после экспериментальной отслоения сетчатки. Инвестируйте офтальмол Vis Sci 43: 1234–1247.
57. 57.Rex TS, Lewis GP, Geller SF, Fisher SK (2002) Дифференциальная экспрессия уровней мРНК конического опсина после экспериментального отслоения и повторного прикрепления сетчатки. Мол Вис 8: 114–118.
58. 58. Nork TM, Millecchia LL, Strickland BD, Linberg JV, Chao GM (1995) Избирательная потеря синих колбочек и палочек при отслоении сетчатки у человека. Arch Ophthalmol 113: 1066–1073.
59. 59. Сакаи Т., Кальдерон Дж. Б., Льюис Г. П., Линберг К. А., Фишер С. К. и др. (2003) Восстановление фоторецепторов конуса после экспериментального отсоединения и повторного прикрепления: иммуноцитохимическое, морфологическое и электрофизиологическое исследование.Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 44: 416–425.
60. 60. Davidorf FH, Havener WH, Lang JR (1975) Макулярное зрение после операции по отслоению сетчатки. Офтальмологическая хирургия 6: 74–81.
61. 61. Росс У.Х., Кози Д.В. (1998) Восстановление зрения при регматогенной отслойке сетчатки без макулы. Офтальмология 105: 2149–2153.
62. 62. Росс WH (2002) Восстановление зрения после отслойки сетчатки без желтого пятна. Глаз (Лондон) 16: 440–446.
63. 63. Diederen RM, La Heij EC, Kessels AG, Goezinne F, Liem AT и др.(2007) Операция по пломбированию склеры после отслоения сетчатки без макулы: ухудшение зрения через более чем 6 дней. Офтальмология 114: 705–709.
64. 64. Хасан Т.С., Саррафизаде Р., Руби А.Дж., Гарретсон Б.Р., Кучински Б. и др. (2002) Влияние продолжительности отслойки желтого пятна на результаты после восстановления склеральной пломбы первичной отслойки сетчатки без желтого пятна. Офтальмология 109: 146–152.
65. 65. Salicone A, Smiddy WE, Venkatraman A, Feuer W (2006) Восстановление зрения после процедуры склерального пломбирования при отслоении сетчатки.Офтальмология 113: 1734–1742.
66. 66. Гарбия М., Грандинетти Ф., Скавелла В., Сесере М., Эспозито М. и др. (2012) Корреляция между результатами оптической когерентной томографии в спектральной области и визуальным исходом после восстановления первичной регматогенной отслойки сетчатки. Сетчатка 32: 43–53.
67. 67. Куадрос М.А., Сантос А.М., Мартин-Олива Д., Кальвенте Р., Тасси М. и др. (2006) Специфическая иммуномарка макрофагов и микроглиальных клеток головного мозга в центральной нервной системе развивающихся и зрелых цыплят.Журнал гистохимии и цитохимии: официальный журнал Общества гистохимии 54: 727–738.
68. 68. Wenningmann I, Dilger JP (2001) Кинетика ингибирования никотиновых рецепторов ацетилхолина (+) — тубокурарином и панкуронием. Mol Pharmacol 60: 790–796.
69. 69. Пилар Г., Нуньес Р., МакЛеннан И.С., Мерини С.Д. (1987) Мускариновая и никотиновая синаптическая активация развивающегося куриного ириса. J Neurosci 7: 3813–3826.
70. 70. Ghai K, Stanke JJ, Fischer AJ (2008) Формирование паттерна периферической маргинальной зоны предшественников в сетчатке курицы.Brain Res 1192: 76–89.
71. 71. Cebulla CM, Ruggeri M, Murray TG, Feuer WJ, Hernandez E (2010) Оптическая когерентная томография спектральной области в модели отслойки сетчатки у мышей. Exp Eye Res 90: 521–527.
72. 72. Jonas JB, Schneider U, Naumann GO (1992) Количество и плотность фоторецепторов сетчатки человека. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol 230: 505–510.

Конус для убоя цыплят (12 конусов)

Конус для убоя цыплят используется для облегчения забоя домашней птицы, обычно кур, уток или гусей.Такие шишки бывают разных размеров, чтобы приспособить их к птицам разного размера. Конус функционирует, удерживая птицу на месте — содержащуюся в неволе птицу можно поместить в воронку головой вперед, чтобы голова животного свисала вниз через небольшую часть воронки. После этого у животного может быть легче получить кровотечение (обычно через разрез в горле), в то время как воронка сдерживает любые движения крыльев и облегчает слив крови. Согласно некоторым источникам, смертоносные конусы обладают дополнительным преимуществом, вызывая чувство дезориентации, расслабления и эйфории у содержащихся в неволе птиц, поскольку некоторые птицы демонстрируют тоническую неподвижность, когда их держат вверх ногами.К некоторым смертоносным конусам прикреплено зажимное устройство, чтобы вывихнуть шею птицы перед кровотечением.

Этот метод можно использовать для убоя небольшого количества птиц, так как убой должен быть гуманным. Весь процесс от поимки до гибели должен выполняться под контролем, чтобы птицы были защищены от любой боли, страданий или страданий, которых можно избежать. Уверенный, терпеливый, спокойный и тихий подход к задаче даст наилучший результат как для птицы, так и для пользователя.

Конус смерти состоит из ограничивающего конуса с зажимным устройством внизу для вывиха шейки. Хотя этот метод не идеален, его можно использовать для убоя небольшого количества птиц. Птица помещается в конус головой вниз. Возьмитесь за шею зажимом и с усилием потяните ручку вниз, чтобы сместить шею.

Конус для убоя кур помогает птицеводам и перерабатывающим предприятиям улучшить свои услуги за счет убоя большего количества птицы в более короткие сроки.Он использует действие перевернутой птицы в конусах из нержавеющей стали на убой, что заставляет кровь течь к их головам, создавая успокаивающий эффект. Также «обнятое» положение цыплят в шишках успокаивает их нервы.

Преимущества конуса для уничтожения птицы

• Конус для уничтожения птицы подходит для всех видов домашней птицы.
• Они делают убой птиц проще и быстрее.

Как использовать конус для уничтожения птицы

• Птицу следует поместить в конус так, чтобы голова свисала ниже.
• Возьмитесь за шею и убейте птицу.
• Проверьте, нет ли признаков того, что птица мертвая, нащупайте шею на предмет щели в позвонках;
• Убедитесь, что птица не дышит / убедитесь, что нет реакции моргания при прикосновении к глазу и в том, что зрачок расширен.
• Затем птицу можно подвергнуть дальнейшей обработке.

Признаки, подтверждающие, что птица мертва

• Пощупайте на шее щель в позвонках
• Убедитесь, что птица не дышит
• Убедитесь, что при прикосновении к глазу нет реакции моргания и что зрачок расширен .

Размеры продукта

• 11,4 ″ W (верхнее отверстие)
• 3,5 ″ W (нижнее отверстие)
• 13,4 ″ H

Узнайте больше о других качественных продуктах на Farmsquare Nig

10 Интересные факты о Chicken Vision

Куры бесконечно очаровательны, будь то коммерческое стадо или приусадебный участок.Хотя мы, возможно, никогда не поймем, что означают все эти причудливые кивки головой, мы сможем лучше понять, как цыплята видят мир, с помощью этих 10 интересных фактов о зрении цыплят.

• Глаза курицы составляют около 10% всей массы головы.
• Цыплята могут видеть на 300 градусов вокруг, потому что их глаза расположены по бокам головы.
• Цыплята четырехцветные. У них есть 4 типа колбочек, которые позволяют им видеть красный, синий и зеленый свет, а также ультрафиолетовый свет.Поэтому они видят намного больше цветов и оттенков, чем мы.
• У цыплят есть дополнительная конструкция с двумя конусами, которая помогает им отслеживать движение.
• Поскольку их глаза очень чувствительны, они могут видеть крошечные колебания света, незаметные для человека. Люминесцентное освещение для цыплят похоже на стробоскопическое освещение для нас, поэтому они часто становятся раздражительными при таком освещении.
• Цыплята могут ощущать присутствие или отсутствие света через шишковидную железу в своей голове, поэтому даже полностью слепая птица может ощущать дневной свет или сезонные изменения.
• У цыплят есть третье веко, называемое мигательной перепонкой, которое горизонтально скользит по глазу, защищая его от пыли и мусора.
• Цыплята могут использовать каждый глаз независимо для разных задач одновременно.
• Цыплята обладают моновидением. Левый глаз дальнозоркий, а правый — близорукий. Это результат того, что они поворачиваются в яйце, так что правый глаз освещается светом через скорлупу, а левый — нет, потому что он направлен к телу.
• Цыплята обладают ужасным ночным зрением, потому что они произошли от динозавров вместо около динозавров, и, по сути, никогда не прятались в темноте тысячелетиями.

Подписывайтесь на наш блог!