Белки из шишек: Поделка белка из шишек

Содержание

кому еще шишки помогают перезимовать / Новости города / Сайт Москвы

На природных территориях Москвы преобладают хвойные деревья из семейства сосновых: ель, сосна, лиственница и пихта. Их семена созревают осенью и остаются в шишках до весны, пока воздух не прогреется до плюс 10 градусов.

Зимой же семена хвойных деревьев являются ценным кормом для многих обитателей леса: белок, соек, дятлов, клестов, бурундуков, мышей и других. Эти животные и птицы не только поедают семена, но и помогают их распространять по лесу.

Также шишки обладают теплоизоляционными свойствами: зимой корням под ними тепло, а летом прохладно. А еще они, постепенно разлагаясь, обогащают почву полезными веществами и служат естественной подкормкой растениям.

Шишки ели любят белки

Шишки у елей растут на самой верхушке, и поэтому их семена разлетаются далеко. Молодые шишки — зеленого цвета, позже они краснеют, а к осени одревесневают.

Белки предпочитают еловые шишки: они проворачивают ее вокруг оси, обгрызая чешуйки и выбирая из-под них семена. Зверек начинает отделять чешуйки всегда с толстого конца шишки — с черешка.

Главные помощники белки — клесты-еловики. В шишках, сброшенных клестами на землю, семена сохраняются больше года. Это происходит, потому что шишки лежат на влажном ковре мхов, плотно смыкая чешуи. Обычно шишку, которую сорвал клест, можно определить по сохранившейся части веточки и хвое.

Сброшенные в морозный период шишки погружаются в рыхлый снег, где их находят мыши-полевки. Эти зверьки обгрызают чешую не столь близко к стержню шишки, как это делает белка, поэтому оставляют его более толстым.

Зверский аппетит: как правильно подкармливать животных зимой

Семенами сосны лакомятся дятлы и клесты-сосновики

Сосновые шишки вырастают только на взрослых деревьях. Они гораздо меньше и тверже еловых. Шишки опадают с дерева лишь после того, как из них выпадут все семена. Поэтому на земле под сосновыми деревьями лежат только пустые шишки.

Любителями семян сосны и ели являются дятлы. Сорвав с дерева шишку, большой пестрый дятел втискивает ее в щель на дереве верхушкой вверх, а затем ударами клюва отгибает чешуйки и вынимает семена. Такие пустые шишки можно часто увидеть под деревьями зимой.

Семенами сосны лакомятся и клесты-сосновики — они достают их при помощи своего необычного клюва. Наличие такой пищи позволяет выводить птенцов даже зимой. Обработанная клестом шишка отличается большим количеством нетронутых чешуй и невынутых семян.

Какие еще шишки можно встретить в природных парках

Лиственница — это единственное дерево, роняющее каждую осень всю свою хвою. Ее шишки имеют яйцевидную форму и меньше еловых и сосновых. Семена лиственницы являются любимым лакомством белокрылого клеста, а также других зимующих в Москве птиц.

Пихта внешне очень похожа на ель, но хвоя у нее гораздо нежнее и мягче. Ее шишки всегда прямо стоят на ветках, словно новогодние свечки. Из-под каждой чешуйки торчат довольно длинные заостренные язычки.

У черной и серой ольхи семена созревают в сережках, похожих на шишки хвойных деревьев. Для чижей и чечеток эти питательные семена являются основным кормом зимой.

Как сделать белку из шишек и пластилина

Шишки и желуди — прекрасный вариант для создания различных поделок.

Гуляя с малышами в лесу или в парке, вы легко можете увидеть шустрых, лесных красавиц – белок. Эти маленькие любопытные зверьки прыгают по веткам с молниеносной скоростью, но, если вы пришли с угощением, они обязательно спустятся и дадут себя разглядеть.

Покажем, как сделать белку из шишек своими руками. Это простая поделка, но в то же время — яркая, эффектная.

А наш подробный мастер-класс поможет в этом.

Приготовьте следующее:

Еловые шишки и сосновые (две нераскрывшихся и обычные)
Желуди
Пластилин

Пошаговое выполнение поделки из шишек «Белка»:

1. Для работы понадобится одна длинная изогнутая еловая шишка для хвоста.
Для тела выбираем еловую шишку с раскрывшимися чешуйками – будут имитировать пушистый мех белочки. Так как делаем белку из шишек и пластилина, то с помощью кусочка мягкого пластилина прикрепим хвост к телу.

2. Далее будем делать лапки – для них нужны две нераскрытые сосновые шишки одинакового размера. Крепим их к телу с помощью пластилина. Это будут задние лапки, они должны быть крепкими, так как играют важную роль в прыжках зверька.

3. Маленькую шишечку крепим к телу (голова). Заготовка для белочки готова!

4. Теперь будем использовать оранжевый пластилин. Сделаем длинные ушки и передние лапки. Аккуратно крепим все элементы к заготовкам. На мордочке крепим глаза, носик. При желании сделаем тонкие усики из сухой травы.

5. Так как белочка живет в лесу, сделаем ей сумочку из желудя. Выбираем из желудей самый красивый, желательно — на веточке. Крепим его к лапке, перекидываем на спину. Получается, что белочка гуляет с сумкой-жёлудем на плече.

6. Известно, что белочка запасает на зиму орехи и желуди, поэтому в другую лапку даём ей самый пузатый желудь или орех.

7. Замечательная поделка готова.

Не забудьте придумать весёлую историю о белочке и про то, как она путешествовала по лесу. Чем больше желудей вокруг белочки разместите, тем интереснее получится композиция.

Если делаете поделку с детьми, подготовьте заранее небольшую коробку или плетеную корзинку с низкими бортами – нужна для создания лесного пространства для зверька. Дно украсьте мхом, сухими листьями, орехами и желудями.

Такая работа обязательно привлечет к себе внимание на любой выставке!

Сайт для мамочек и бабушек — ХРАНИТЕЛЬНИЦ семейных кучек

Поиск

Наша группа ВКонтакте

Счетчик

Счетчик Яндекс

Аналитика

рекламный блок 1

рекламный блок 2

рекламный блок 3

помощь детям

СУПЕР РЕКЛАМА

рекламный блок 4

рекламный блок 5

рекламный блок 6

Поделки из ШИШЕК — 35 лучших идей + инструкция.

Добрый день, сегодня я подготовила большую статью, посвященную поделкам из шишек (и сосновых и еловых). Я собрала вместе разные ТЕХНИКИ работы с шишками. И постараюсь подробно рассказать, как создавать каждую из представленных здесь поделок. В статье вы увидите детские поделки из шишек и пластилина, работы посерьезнее для конкурса в школу или сад, которые можно сделать с помощью родителей. Короче здесь будут собраны лучшие примеры, интересные решения и удачные находки в мире шишечного творчества. А поделки из шишек на Новый Год я вынесла в отдельную статью Новогодние поделки из шишек — 100 идей для детей.

Итак, давайте посмотрим, какие идеи поделок из шишек я собрала для вас сегодня.

Идея поделки

из лущеных шишек.

(7 новых идей)

Если разобрать шишку на чешуйки (выдернуть их клещами), то можно из таких чешуек выложить любую картину (пушистую собачку, природный пейзаж, или вот такую грозную сову.

Можно сделать конус из бумаги… и с помощью клеевого пистолета (продается в строительном магазине за 5 долларов) обклеить весь конус чешуйками шишки, располагая внахлест друг на дружку (как черепуцу). Получится елочка. Начинать обклейку чешуйками шишки нужно с нижней части конуса… и постепенно ряд за рядом двигаться к верхушке конуса.

По такому же принципу можно выложить панцирь пластилиновой черепахи, или шляпку грибочков.

Или очень хорошая идей которая сама просится под шишечные чешуйки – это ЕЖИКИ. Тело лепим из пластилина. Утыкаем спинку острыми чешуйками. А мордочку формируем из пучка-метелочки

. Вопрос, из чего сделать этот пучок? Вот я думаю что можно попробовать из обычной метлы нарезать тонких прутиков… Или взять жмых от кукурузы и нарезать его ножницами на тонкие прямые стружки – собрать их в пучок, пучок согнуть пополам (место сгиба, будет кончиком носа). Далее этот согнутый пучок распушиваем… чтобы он растопырился метелочкой по сторонам – и этой растопыркой вклеиваем в носовую часть пластилиновой поделки.

Кстати, я тут подумала – наверное, мордочку можно сделать и не из природного материала какурузовой кожи… а нарезать из бумаги (мелких узких полосок)… или взять элементарно нитки (сделать пучок, согнуть пополам, линию сгиба пучка обмотать в носик-пупочку). Возможно нитки нужно будет потом накрахмалить, чтобы они держали жесткую форму.

По такому же принципу делается вот эта детская поделка — БЕЛКА из шишек и пластилина.

Сначала лепится тельце… потом на теле карандашиком очерчиваются границы зон. Одну зону мы будем покрывать шишечной чешуей, в другую зону мелкой метелочкой из бумаги (или природных материалов).

Когда тело готово – мы отдельно лепим из пластилина хвост… и его верхнюю часть утыкаем шишечными чешукйкаи. А нижнюю часть хвоста облепливаем белой тонкой нарезкой бумажного ворса.

Можно слепить из пластилина ОРЛА… или другую птицу — из чешуек шишки сделать оперение.

Можно такими чешуйками выложить ДОМИК ДЛЯ ФЕЙ. Делается такой домик очень просто. Для этого нам нужен кабачок вытянутой формы (покупать надо не свежий кабачок с тонкой кожей. Которую легко проткнуть ножом… а огородный уже зажелтевший или затемно-зеленевший, кожица которого не то что ногтем не продавится, но и ножом не с первого раза. Такие твердые огородные кабачки продают бабки на рынке. Пройдитесь по базарному ряду, потыкайте ногтем втихаря и выберете. Если ваш кабачок не будет по форме ТАКОЙ ГРУШЕПОДОБНЫЙ как на фото домика внизу – не переживайте… просто ваша крыша домика будет чуть другой формы (не такая вытянутая, а более округлая). Красоты вашей поделки из шишек это не убавит. И главное постарайтесь выбрать такой который можно поставить на попку – и чтобы он не падал… Но если и будет падать, то ничего страшного – можно просто подложить пластилина под его основание.

Далее… КАК ДЕЛАТЬ ДОМИК ИЗ ТЫКВЫ С КРЫШЕЙ ИЗ ШИШЕК.

Кабачок можно оставить целым (не вынимать серединку) – но будьте готовы к тому, что кабачок со временем может загнить изнутри.… А можно срезать нижнюю попковую часть. Вынуть ложкой его содержимое… и высушить на солнце, чтобы его корка затвердела с внутренней стороны (так ваш домик будет вечным, и не сгниет).

Кабачок красим в коричневый цвет (если гуашью красите – то после покраски хорошенько обрызкайте весь покаршенный кабачок ЛАКОМ ДЛЯ ВОЛОС, так краска перестанет пачкать руки)

Детали дверей, окон и розочки над дверным проемом ЛЕПИМ РУКАМИ. Лепить лучше всего из полимерной глины (пластики), которая затвердевает в духовке.

НО ЕСЛИ у вас нет пластики – то подойдет соленое тесто (вода + соль + клей ПВА + мука + бумажная салфетка). Я добавляю в соленое тесто клей пва и мелконарваную бумажную салфетку для того, чтобы тесто при высыхании не трескалось, а было гладкое и хорошо держало твердую форму.

ИЛИ можно слепить все детали поделки из пластилина… а чтобы он не плыл на солнце его нужно затвердить. В качестве затвердителя подойдет лак в баллончиках (из строительного магазина)… или лак для волос… или лак для ногтей. Единственный побочный эффект в том, что фигурка будет иметь блеск от лака. Но это не страшно. Главное после затвердения пластилина не пытаться его ПОМЯТЬ (лаковая корка может треснуть). Поэтому лаком будем покрывать уже готовые прилепленные к кабачку двери и окна.

ПОДЕЛКИ ИЗ ВЕРХУШЕК ШИШЕК.

(берем верхнюю часть шишки)

А если шишки начать облущивать с кончика – а верхушки шишек оставить с чешуйками. То к таким чешуйчатым шляпкам можно приклеить круглые подушечки, или помпоны. В квадрат холщовой ткани кладешь шарик ваты (или синтепона), собираешь края квадратика в пучок и перевязываешь ниточкоа (получается круглый узелок (как у ежика в тумане из мультика). Этот круглый узелок сверху (там где завязка) накрываешь шишковой шляпкой – на клей.

И получится поделка-желудь. Такие шишечные желуди можно подвесить как декор на венок из ивовых прутьев.

Можно вместо холщевых мешочков использовать половинку пенопластового яйца… предварительно ее надо покрасить (например в золотую краску).

Или такая шишечная верхушка может послужить панцырем для пластилиновой черепахи.

А теперь перейдем к поделкам из ЦЕЛЬНЫХ шишек. Начнем мы с птичек… потом возьмем зверей… а потом и человечков.

Птицы из шишек

(сосновых и еловых)

ПИНГВИНЫ.

Вот такая красивая идея пингвинов из еловых шишек требует пластилина и белой краски. Из пластилина лепим голову и крылышки – а краской покрываем пузик. Или можно крылышки сделать из жмыха от початков кукурузы.

СОВЫ И ПТЕНЧИКИ.

Вот ниже на фото видно что вспомагательным материалом могут послужить кусочки фетра, картона, перышки, а также шляпки желудей (их можно использовать как выпуклые глаза птичек — повернуть шляпки обратной стороной, покрасить в белый цвет и черным маркером нарисовать зрачки.

Если шишки поставить друг на друга, то можно сделать вот такие поделки-совы. Крылья и брови делаются из кусочков коры, глаза и нос из бумаги. Бумажный кружок для глаза совы можно надрезать по кругу ножницами и через эти надрезы сделать обмотку нитками – так мы получим выразительные лучики на глазах сов из шишек.

А если сосновую шишку обвалять в нащипанной на волокна вате, то она получит вот такой пушисто-белый цвет. Из таких пушистых шишек можно сделать белых сов, птенчиков, снеговичков или попробуйте сделать пушистого песика.

ПАВЛИНЫ И ИНДЮКИ.

Можно из шишки сделать павлина. Для этой поделке нужна плотная бумага для головы, и мягкая креповая бумага для оперения хвоста.

А вот еще вариант из той же породы поделок. Здесь принцип тот, но птица уже не павлин, а индюк.

ВОРОБЬИ из сосновых шишек

Вот еще один вариант птички из шишки. Крылышки у воробышка сделаны из кусочков коры, а голова это шарик сшитый из махровой ткани (если у вас есть кусок махровой салфетки, вы можете го пожертвовать на создание этой птички — меховая ткань тоже подойдет). Лучше когда салфетка белая…тогда можно покрасить лобную часть головы птенчика черной краской. Плюс это пучок ткани, который оттянули щепоткой, обмотали эту оттянутую щепотку ниткой у основания (чтобы она зафиксировалась) – и покрасили черным. К голове пришили или приклеили глаза бусинки.

Или голову можно сделать из помпона. Взять обычные белые нитки и намотать их в два дырявых кружка… как обычно делают помпоны своими руками (загуглите, вы найдете такой урок).

Или можно головку для птички сделать из обычного пенопластового шарика. Они продаются в поделочных магазинах, или их можно заказать в интернет-магазинах (они дешевые очень). А если из китая заказать на сайте али-эксперсс… то вообще дешево получится.

Голова из пластилина получится ОЧЕНЬ ТЯЖЕЛОЙ, и птичка будет падать…
Но еще можно сделать головы из пинг-понговых шариков.

А еще голову можно свалять из шерсти (продается шерсть для валяния)… тоже недорого совсем. Ее нужно положить в мисочку с теплой мыльной водой – и прямо в воде катать из нее шарик… по мере катания шарик становится все плотнее и плотнее… (2-5 минут надо катать, долго). И потом мы его достаем и сушим. И получаем плотный как валенок шарик. Он легкий и хорошо держится на шишке, не перевешивая и не перегружая поделку.

Ножки для птичек можно сделать из проволки… проволку можно добыть из больших КАНЦЕЛЯРСКИХ СКРЕПОК. Крылышки из бумаги крепятся на пластелин внутри чешуек.

ЦАПЛИ, ЛЕБЕДИ И СТРАУСЫ из шишек.

Вот примеры ВЫСОКИХ ПТИЦ из длинных шишек. Хвост для левой птицы с фото ниже делается из полоско бумаги, которые обклеиваются чешуйками, выдернутыми из шишки.

Если у вас есть перья (повыдергивали из подушки, например) то можно из шишек сделать красивых лебедей. Шеи можно скатать из пластилина и проволоки.

Вот еще примеры поделок с перьями – страусы из шишек. Шея и головя лепятся из пластилина. Секрет устойчивости таких тонких и длинных шей в проволоке которая внутри этих шей спрятана (закатана в пластилин) как металлический каркас… конец проволоки торчит наружу и именно он втыкается в шишку.

Благодаря гибкости проволочной шеи ее можно загнуть в любую сторону и придать любой изгиб нашей поделке из шишек (как на нижнем фото). Кстати обратите внимание что одна из птиц сделана в виде ФЛАМИНГО… а на заднем плане мы видим розовую овечку из шишек.

ЕЖИКИ и МЫШКИ

ИЗ СОСНОВОЙ ШИШКИ.

Ежики из шишек делаются двумя способами. Либо мы лепим мордочку из пластилина и прикрепляем к шишке. Либо эту мордочку мы вырезаем из фетра (картона). Клеим пуговки-глазки и приклеиваем фетр к шишке.

А вот идеи по созданию медведей из шишек. Грубая почтовая нитка (для сургучных опечатываний бандеролей) – подойдет для обмотки морды и живота медведика. На шишечную морду предварительно налепливаем пластилин, чтобы нитка прилипала.

А вот белочка – голова делается из помпона (продаются в поделочных магазинах) руки и ушки из проволочных ершиков (тоже продаются там же).

А вот ниже мы видим мышек, головы которых простые конусы из серого фетра (или флиса).

Если вы купите кусочки меха, то сможете сделать вот такие поделки из шишек для новогодней елки. Еще больше новогодних поделок из природных материалов я выложу в отдельную статью и тогда здесь появится на нее ссылка.

ЧЕЛОВЕЧКИ как поделки из шишек.

(несколько способов).

Помните, чуть выше, я объясняла как из кусочка войлочной шерсти – в мыльной теплой воде – скатать войлочный твердый шарик. Вот из таких шариков и шишек можно сделать человечков.

Или можно заменить войлочные шарики пинг-понговыми или деревянными.

Вот пример поделки МАМА И МАЛЫШ, сделанные из шишек и войлока… волосы мамы сделаны из оранжевой войлочной шерсти. Ручки тоже из шерсти скатаной в жгутик в теплой мыльной воде.

А вот семейка гномов из шишек. Поделка из войлочной головы и кусочков фетровой или флисовой ткани + бубенчики на шапочках.

Еще такая же поделка. Гномики из шишек – на голове каждого гнома шапочка (ячейка от бумажной касетницы для яиц). Ножки – это листики, наклеенные на картонку, Борода из кусочка ватного диска, приклеенного к мордочке из картона.

И к семейству гномов можно сделать из шишек еще одну компанию — лесных жителей волшебного леса – ФЕЙ. Личико скатать из пластелина – к верхушке головы приклеить пучок нарезанных ниток – наверх шляпку от желудя. И сзади приклеить яркие крылышки из картона или фетра.

И еще из шишек можно сделать прекрасных лыжниц в ярких шарфиках. Волосы – пучок ниток. Шарфики – кусочек елочной гирлянды.

Шапочки таким лыжницам можно связать крючком или на спицах. Шарфики вырезать из флиса или мягкой креповой бумаги (можно просто белый лист бумаги сильно искомясить… и вырезать из него шарфик – он будет мягкий и легко обернется вокруг шишки. Лыжи из картона (или палочек от мороженого)… зубочистки служат лыжными палками.

Еще больше поделок из шишек в новогодней тематике ДЕДЫ МОРОЗЫ… ОЛЕНИ… ЕЛКИ… РОЖДЕСТВЕНСКИЕ ВЕНКИ… я перенесла в отдельную статью. Там вы узнаете что можно сделать из шишек к Новому Году.

А еще у меня есть отдельные статьи по поделкам из другого продного материала.

Удачных вам творческих идей.

Ольга Клишевская, специально для сайта Семейная Кучка.

У нас уже есть статьи об осенних поделках. Но с каждым годом я стараюсь обновлять коллекцию работ, чтобы вы всегда имели под рукой свежие идеи. Итак, осень: листья, шишки, каштаны… руки сами просят собрать побольше этого добра и принести домой. Но что потом с этим делать? Какие можно придумать интересные работы и как нам поможет в конструировании пластилин? Давайте ответим на эти вопросы.

И еще, эта сборка идей больше направлена на деток разного возраста. Но я постаралась ее сделать интересной и для малышей с разными интересами. Взрослые могут активно помогать карапузам, могут добавить ноту игры в это «серьезное» занятие и устроить мини-соревнование. А могут и сами воспользоваться идеями из сборки, чтобы украсить свой дом.

Осенние поделки из шишек своими руками для школы

Идей для школы много. Это и животные, и птицы, и сказочные персонажи. Можно сделать и целые композиции, ведь шишки – отличный материал.

Лебеди.

Проволоку нужно скрутить в виде буквы «S». Верхнюю часть скрутить спиралью.

К широкой стороне шишки фиксируется на клей синельная проволока. Спираль должна оставаться вверху.

По бокам шишки и к узкой части крепятся перья.

К спирали (голове лебедя) приклеиваются глаза и клюв.

Картина «Совята».

Отрезается у шишек широкая часть. Таких заготовок нужно 4.
Соединяются попарно 2 части.
Из бумаги вырезаются глаза, клюв и уши двух сов. Приклеиваются на верхние части заготовок. Получаются совы.
Этих птичек можно приклеить к плотному картону (на картон предварительно приклеивается лист цветной бумаги).
Осталось обклеить по контору картона кору дерева. А «швы» можно задекорировать мхом или листиками туи.

Мышата.

Понадобятся длинные еловые шишки. Узкая часть шишки обрезается.
К обрезанной стороне приклеивается желудь или орех.
Сверху желудя проделываются прорези. В них вставляются чешуйки шишки.
На желуде рисуются глазки и носик.
С другой стороны шишки приклеивается высохшая виноградная веточка, скрученная спиралькой.
Под мышкой приклеиваются 4 лапки из чешуек шишки.

Лесовик.

К узкой части фиксируются 2 половинки ореховой скорлупы.
Верх широкой части украшают маленькие листочки, сложенные в виде шапки.
По бокам шишки крепятся маленькие шишечки. Это – руки.
Из веточки можно сделать палку.
А из сосновых иголок – бороду.

Павлин.

Одна сосновая шишка разбирается на чешуйки. Из них конструируется хвост павлина и каждая часть фиксируется к другой.
Этот хвост приклеивается к узкой части шишки.
В широкой части приклеивается сухая веточка, которая потом разукрашивается так, чтобы она была похожа на голову павлина.
Осталось приклеить ноги-веточки. И всю поделку покрыть лаком.

Вот такие идеи. Если у вас есть свои работы, делитесь ими!

Осенний букет из листьев и шишек

Такой букет легко сделать. Листья можно взять любые, только стоит уделить внимания их цвету. Ведь от того, насколько листья пестрые, будет зависеть и красота букета.

К широкой части шишки фиксируется при помощи зеленого пластилина палочка.
Шишка окрашивается. И присыпается блестками.
Палочка окрашивается в зеленый цвет.
Букет собирается в вазе. Или же, его можно перевязать лентой.

Как варианты покажу еще 2 способа, как из шишки сделать «цветы».

Эти цветы можно и нужно сочетать с листьями деревьев, чтобы получить красивый букет. О том как красить шишки тут.

А тут вы найдете различные венки и топиарии из листьев и шишек.

Быстрые и красивые поделки из шишек и желудей своими руками для детского сада

Простые поделки, которые можно быстро подготовить, тоже входят в эту коллекцию. Такие изделия могут заинтересовать крох.

Птичка.

К шишке приклеивается небольшой шарик из пенопласта.
По бокам приклеиваются кусочки бумаги, вырезанные треугольником в форме крыльев.
Сзади – бумажный хвост.
Внизу к шишке приклеиваются веточки. Веточки предварительно нужно собрать в форме лапок птицы.
Поделка окрашивается.

Динозавр.

На самом деле все очень просто. Понадобится соединить какое-то количество шляпок желудей. Таких заготовок нужно 6: шея с головой, 4 ноги, хвост.
Все это крепится к шишке: голова – к широкой части, соответственно хвост – к узкой. А лапы внизу.

Мамонт.

Эта поделка делается ровно так же, как и предыдущая. С той только разницей, что к широкой части фиксируется не шея с головой, а хобот.

Поделка осенняя фантазия из шишек

Я уже говорила, что из шишек можно сделать не одну поделку, а целую картину, или композицию. Вот эти композиции на тему фантазии про осень.

Мишки на прогулке.

Мишки – это соединенная шишка и отрезанная широкая часть шишки.
Мишки располагаются на полянке, покрытой травкой.
В композиции присутствует Мышка и Совенок.
На полянке стоит дом, который легко собрать и сложить из толстых веточек.

Пришла осень.

К картону приклеиваются желтые осенние листья.
На листьях располагаются шишки. Они, словно деревья, что сбросили листву.
Кроме шишек в композиции есть высохшие веточки и цветы.
А из пластилина можно сделать грибочки.

В каждой композиции могут присутствовать те элементы, которые вы сами придумаете и смастерите.

Все новинки поделок из шишек и каштанов

Отдельно из каштанов без шишек можно сделать много интересных поделок. Например, паучок или божья коровка. Достаточно просто окрасить каштан в нужный цвет и приделать из проволоки или зубочистки ножки и усики. Но есть работы и посложнее, состоящие из нескольких каштанов, из веточек, листочков и т.д.

А вот эта работа, в которой есть и каштан, и шишка.

А вот какие шикарные олени.

Улитка (на фото справа).

Нужно соединить зубочистками 3 и отдельно 4 каштана.
Эти две заготовки соединить под прямым углом.
Сверху той заготовки, что состоит из 4 частей, нужно прикрепить шишку.
Осталось приделать глаза улитке. Они располагаются на синельной проволоке.

Кроме улитки можно сделать:

Каштаны очень хороший материал, который легко комбинируется с остальными природными материалами. Так, благодаря небольшим манипуляциям можно сделать ряд интересных поделок.

А вот забавные звери из пластилина и каштанов.

Совята из желудей и каштанов.

А вот гусеницы и улитки из шишек, каштанов и пластилина.

Поделки из шишек и пластилина для детей 4-5 лет в детском саду

Что сможет карапуз в 4 года? Многое, если мы ему поможем! Вот простые идеи для детского сада:

Курица.

Шишка предварительно окрашена. И на ней небольшой декор из маленьких точечек.
Из пластилина вылеплены: шея и голова, гребешок, клюв и лапы.

Белка (на фото слева).

Из шишек состоят три детали: хвост, голова и туловище.
Ушки, лапки, мордочка, глазки и носик вылеплены из пластилина

Рыжая белка.

Но есть еще один простой вариант сделать из шишки и пластилина поделку. В этом варианте нужна только одна шишка – это хвост.
А туловище, голова, передние лапы, глаза и нос – из пластилина.
Но есть в этой конструкции еще один материал – желуди. Из них сделаны задние лапы.

Поделки очень простые. Но не стоит забывать, что карапузам стоит многое объяснить и помочь, чтобы они справились с задачей.

Поделки из шишек и листьев на тему осень 1-2 класс

Сейчас вас повеселю! Я нашла такую простющую поделку, которую сделать легко, но при этом она выглядит потрясающе классно!

Сова

Загружаем обычный полиэтиленовый пакет сухими листьями, шишками, желудями.
Завязываем по обе стороны края пакета так, чтобы выглядывали стебелечки листьев.
Приклеиваем на пакет «глаза», «лапы» и «клюв» птички.

А теперь покажу работы, где есть и листья, и шишки.

Феечки из шишки и ореха.

К широкой части шишки приклеивается орех. Орех – это голова. А поэтому сразу оформляем все необходимые детали головы: глаза, нос и рот.

Ленточкой перевязываем «шею» (место соединения шишки с орехом.

Приклеиваем веточки-ручки. Из ниток или мха делаем «прически».

Сзади приклеиваем листочки-крылья. По бокам ручки — веточки.

Совенок.

На широкой части шишки располагаем огромные глаза совеныша, вырезанные из бумаги картона или из шляпок желудей.
Между глазами – клюв (можно из фетра, бумаги или коры дерева).
Сверху из листочков делаем ушки.
Можно украсить совенка прической из веточек туи.
Эти же веточки располагаются вокруг совы.
Не забываем совенку приклеить лапки.

Выглядят работы так, словно их очень сложно сделать. Но, на самом деле, они очень легкие.

Ежик из природного материала и шишек

Что взять за основу, к которой будем приклеивать шишки? Можно вырезать из темной ткани большую «капельку». Ее сшить и набить синтепоном, ватой или чем-то еще, например, детскими носочками, из которых кроха вырос. Главное, чтобы основа имела ровную поверхность и не топорщилась с разных сторон. А можно взять пенопласт и окрасить в черный. А можно даже бутылку.

Этапы работы:
Узкая сторона «капельки» – это нос и мордочка. К ней мы приделываем носик, усики и глазки.
Широкую сторону всю обклеиваем шишками.
Поверх шишек фиксируем ягоды, грибочки, листики и фрукты.

Должен получиться настоящий симпатяга!

Как сделать сову из шишек

Поделка «Сова» очень пользуется популярностью. А из шишки ее сделать так просто!

Первый вариант.

Вырезаем 2 круга из картона.

Нарезаем джутовую, пеньковую или сургучную веревку на небольшие кусочки.

Обклеиваем с помощью ПВА этой веревкой кружочки так, чтобы нити веревка расходилась от середины к краю, как лучики солнца. Причем в центре нужно оставить дырочку, в которую потом вставим глаз — пуговицу.

Обрезаем края веревочек, чтобы получился ровный кружочек. Выравниваем два кружка, прикладывая один к другому.

В кружочке в дырочку посередине вдеваем готовые из пластика глаза.

Сухие веточки нарезаем на небольшие полочки. Это – реснички.

Приклеиваем реснички с обратной стороны глаза с помощью термоклея.

Вот такие настоящие совиные глаза получились.

Если у шишки не выступает веточка, которой она крепилась к дереву, значит, нужно приклеить клюв посередине широкой части шишки.

Вокруг клюва располагаем глаза.

Толстую веточку обматываем с двух сторон толстой проволоки. Должно быть похоже на пальцы лапы совы.

Продеваем тонкую проволоку между толстой.

Этой проволокой мы будем привязывать веточку с «лапами» к «телу» (шишке) совы.

Такую сову можно подвесить, приделав сзади птички петельку из веревки.

Автор https://youtu.be/QadCCLC_Yds

Второй вариант зимней совы.

Заталкиваем вату в промежутках между чешуйками шишки. Вата должна немного торчать!

Приклеиваем готовые пластиковые глаза (можно сделать из пластилина или фетра) к широкой части шишки. Приклеиваем и крылья, и нос.

Вот так просто, что и малыш справится!

Понравилась коллекция? Тогда приходите в гости за новыми идеями для творческого вдохновения. А для этого оформите подписку на новые статьи сайта!

Еще по теме осенних поделок, которые мы делали в прошлом году:

Белка из пластилина и шишки

Белочка из шишек

Из каких природных материалов получаются самые красивые поделки? Наверное, из шишек крымской сосны. По сравнению с каштанами, желудями или орехами изделия получаются большого размера, над поделкой ребятам легче работать, проще прилеплять пластилиновые детали.

Кого можно сделать из сосновой шишки? Кого угодно – волка, лису, сову или белку. Вот она – рыжехвостая красавица. Затаилась на ветках среди пестрой зелени. С задачей по изготовлению белки вполне справятся ребята 5-7 лет.

Для поделки понадобятся:

— одна сосновая шишка
— куски оранжевого и черного пластилина
— осенние листья для оформления лесной полянки.

Итак, белка – это симпатичный грызун с длинным пушистым хвостом и продолговатыми остроконечными ушами. Животное обитает на всех континентах, кроме Австралии, предпочитает селиться в дуплах, а иногда и в подвалах (на чердаках) больших домовладений. Белки не боятся брать пищу из человеческих рук. Считается, что рыжих зверей легко приручить.

Работу над поделкой начинают с лепки основных деталей. Из оранжевого пластилина оформляют брюшко, похожее на куриное яйцо, остроконечные уши и удлиненный нос. Глаза рыжего грызуна – черные шарики.

Соединенные элементы должны выглядеть примерно так, как показано на картинке.

Дальше пластилиновые части тела надо перенести на сосновую шишку и добротно прикрепить к чешуям. Представленная белка очень похожа на домашнего питомца. Видно, что в отличие от своих диких собратьев животное хорошо питается.

Невозможно спокойно заниматься творческим процессом без демонстрации поделки сбоку. Хороша белочка?

Сделать четыре беличьих конечности – пустяковое дело. Передние лапки, словно две вытянутые капельки с коготками на широких концах. Нижние лапки – два утолщенных овала, отдаленно напоминающие стопы. Коготки продавливают в пластилине стеком или зубочисткой. Проводить работу лучше на доске для лепки (чтобы не испачкать стол).

На следующем этапе лапки прикрепляют к сосновому туловищу и придают им желаемое положение. Чем шире будут прилеплены нижние конечности, тем устойчивее получится белка.

Осталось оформить красавице пушистый хвост с удлиненной шерсткой. На картинке показан один из вариантов. Остроконечную лепешку декорируют полосками и слегка заворачивают по спирали. Так хвост будет хорошо держать форму. Вы можете использовать для хвоста искусственный мех, так он получится более правдоподобным.

Рыжий грызун во всей красе. Поделка из шишки и пластилина «Белка» готова.

И наконец, показ осенней композиции в целом. Сейчас животное поскачет вглубь леса за орехами и грибами.

На этом мастер класс заканчивается. До новых встреч!

Семейная Кучка

Добрый день, сегодня я подготовила большую статью, посвященную поделкам из шишек (и сосновых и еловых). Я собрала вместе разные ТЕХНИКИ работы с шишками. И постараюсь подробно рассказать, как создавать каждую из представленных здесь поделок. В статье вы увидите детские поделки из шишек и пластилина, работы посерьезнее для конкурса в школу или сад, которые можно сделать с помощью родителей. Короче здесь будут собраны лучшие примеры, интересные решения и удачные находки в мире шишечного творчества. А поделки из шишек на Новый Год я вынесла в отдельную статью Новогодние поделки из шишек — 100 идей для детей.

Итак, давайте посмотрим, какие идеи поделок из шишек я собрала для вас сегодня.

Идея поделки

из лущеных шишек.

(7 новых идей)

Можно сделать конус из бумаги… и с помощью клеевого пистолета (продается в строительном магазине за 5 долларов) обклеить весь конус чешуйками шишки, располагая внахлест друг на дружку (как черепуцу). Получится елочка. Начинать обклейку чешуйками шишки нужно с нижней части конуса… и постепенно ряд за рядом двигаться к верхушке конуса.

По такому же принципу можно выложить панцирь пластилиновой черепахи, или шляпку грибочков.

Или очень хорошая идей которая сама просится под шишечные чешуйки – это ЕЖИКИ. Тело лепим из пластилина. Утыкаем спинку острыми чешуйками. А мордочку формируем из пучка-метелочки. Вопрос, из чего сделать этот пучок? Вот я думаю что можно попробовать из обычной метлы нарезать тонких прутиков… Или взять жмых от кукурузы и нарезать его ножницами на тонкие прямые стружки – собрать их в пучок, пучок согнуть пополам (место сгиба, будет кончиком носа). Далее этот согнутый пучок распушиваем… чтобы он растопырился метелочкой по сторонам – и этой растопыркой вклеиваем в носовую часть пластилиновой поделки.

Кстати, я тут подумала – наверное, мордочку можно сделать и не из природного материала какурузовой кожи… а нарезать из бумаги (мелких узких полосок)… или взять элементарно нитки (сделать пучок, согнуть пополам, линию сгиба пучка обмотать в носик-пупочку). Возможно нитки нужно будет потом накрахмалить, чтобы они держали жесткую форму.

По такому же принципу делается вот эта детская поделка — БЕЛКА из шишек и пластилина.

Сначала лепится тельце… потом на теле карандашиком очерчиваются границы зон. Одну зону мы будем покрывать шишечной чешуей, в другую зону мелкой метелочкой из бумаги (или природных материалов).

Когда тело готово – мы отдельно лепим из пластилина хвост… и его верхнюю часть утыкаем шишечными чешукйкаи. А нижнюю часть хвоста облепливаем белой тонкой нарезкой бумажного ворса.

Можно слепить из пластилина ОРЛА… или другую птицу — из чешуек шишки сделать оперение.

Можно такими чешуйками выложить ДОМИК ДЛЯ ФЕЙ. Делается такой домик очень просто. Для этого нам нужен кабачок вытянутой формы (покупать надо не свежий кабачок с тонкой кожей. Которую легко проткнуть ножом… а огородный уже зажелтевший или затемно-зеленевший, кожица которого не то что ногтем не продавится, но и ножом не с первого раза. Такие твердые огородные кабачки продают бабки на рынке. Пройдитесь по базарному ряду, потыкайте ногтем втихаря и выберете. Если ваш кабачок не будет по форме ТАКОЙ ГРУШЕПОДОБНЫЙ как на фото домика внизу – не переживайте… просто ваша крыша домика будет чуть другой формы (не такая вытянутая, а более округлая). Красоты вашей поделки из шишек это не убавит. И главное постарайтесь выбрать такой который можно поставить на попку – и чтобы он не падал… Но если и будет падать, то ничего страшного – можно просто подложить пластилина под его основание.

Далее… КАК ДЕЛАТЬ ДОМИК ИЗ ТЫКВЫ С КРЫШЕЙ ИЗ ШИШЕК.

Детали дверей, окон и розочки над дверным проемом ЛЕПИМ РУКАМИ. Лепить лучше всего из полимерной глины (пластики), которая затвердевает в духовке.

НО ЕСЛИ у вас нет пластики – то подойдет соленое тесто (вода + соль + клей ПВА + мука + бумажная салфетка). Я добавляю в соленое тесто клей пва и мелконарваную бумажную салфетку для того, чтобы тесто при высыхании не трескалось, а было гладкое и хорошо держало твердую форму.

ИЛИ можно слепить все детали поделки из пластилина… а чтобы он не плыл на солнце его нужно затвердить. В качестве затвердителя подойдет лак в баллончиках (из строительного магазина)… или лак для волос… или лак для ногтей. Единственный побочный эффект в том, что фигурка будет иметь блеск от лака. Но это не страшно. Главное после затвердения пластилина не пытаться его ПОМЯТЬ (лаковая корка может треснуть). Поэтому лаком будем покрывать уже готовые прилепленные к кабачку двери и окна.

ПОДЕЛКИ ИЗ ВЕРХУШЕК ШИШЕК.

(берем верхнюю часть шишки)

А если шишки начать облущивать с кончика – а верхушки шишек оставить с чешуйками. То к таким чешуйчатым шляпкам можно приклеить круглые подушечки, или помпоны. В квадрат холщовой ткани кладешь шарик ваты (или синтепона), собираешь края квадратика в пучок и перевязываешь ниточкоа (получается круглый узелок (как у ежика в тумане из мультика). Этот круглый узелок сверху (там где завязка) накрываешь шишковой шляпкой – на клей.

И получится поделка-желудь. Такие шишечные желуди можно подвесить как декор на венок из ивовых прутьев.

Или такая шишечная верхушка может послужить панцырем для пластилиновой черепахи.

Птицы из шишек

(сосновых и еловых)

ПИНГВИНЫ.

СОВЫ И ПТЕНЧИКИ.

Вот ниже на фото видно что вспомагательным материалом могут послужить кусочки фетра, картона, перышки, а также шляпки желудей (их можно использовать как выпуклые глаза птичек — повернуть шляпки обратной стороной, покрасить в белый цвет и черным маркером нарисовать зрачки.

А если сосновую шишку обвалять в нащипанной на волокна вате, то она получит вот такой пушисто-белый цвет. Из таких пушистых шишек можно сделать белых сов, птенчиков, снеговичков или попробуйте сделать пушистого песика.

ПАВЛИНЫ И ИНДЮКИ.

Можно из шишки сделать павлина. Для этой поделке нужна плотная бумага для головы, и мягкая креповая бумага для оперения хвоста.

А вот еще вариант из той же породы поделок. Здесь принцип тот, но птица уже не павлин, а индюк.

ВОРОБЬИ из сосновых шишек

Вот еще один вариант птички из шишки. Крылышки у воробышка сделаны из кусочков коры, а голова это шарик сшитый из махровой ткани (если у вас есть кусок махровой салфетки, вы можете го пожертвовать на создание этой птички — меховая ткань тоже подойдет). Лучше когда салфетка белая…тогда можно покрасить лобную часть головы птенчика черной краской. Плюс это пучок ткани, который оттянули щепоткой, обмотали эту оттянутую щепотку ниткой у основания (чтобы она зафиксировалась) – и покрасили черным. К голове пришили или приклеили глаза бусинки.

Или голову можно сделать из помпона. Взять обычные белые нитки и намотать их в два дырявых кружка… как обычно делают помпоны своими руками (загуглите, вы найдете такой урок).

Или можно головку для птички сделать из обычного пенопластового шарика. Они продаются в поделочных магазинах, или их можно заказать в интернет-магазинах (они дешевые очень). А если из китая заказать на сайте али-эксперсс… то вообще дешево получится.

Голова из пластилина получится ОЧЕНЬ ТЯЖЕЛОЙ, и птичка будет падать… Но еще можно сделать головы из пинг-понговых шариков.

А еще голову можно свалять из шерсти (продается шерсть для валяния)… тоже недорого совсем. Ее нужно положить в мисочку с теплой мыльной водой – и прямо в воде катать из нее шарик… по мере катания шарик становится все плотнее и плотнее… (2-5 минут надо катать, долго). И потом мы его достаем и сушим. И получаем плотный как валенок шарик. Он легкий и хорошо держится на шишке, не перевешивая и не перегружая поделку.

ЦАПЛИ, ЛЕБЕДИ И СТРАУСЫ из шишек.

ЕЖИКИ и МЫШКИ

ИЗ СОСНОВОЙ ШИШКИ.

А вот ниже мы видим мышек, головы которых простые конусы из серого фетра (или флиса).

ЧЕЛОВЕЧКИ как поделки из шишек.

(несколько способов).

Помните, чуть выше, я объясняла как из кусочка войлочной шерсти – в мыльной теплой воде – скатать войлочный твердый шарик. Вот из таких шариков и шишек можно сделать человечков.

Или можно заменить войлочные шарики пинг-понговыми или деревянными.

Новогодние поделки ИЗ ШИШЕК (45 идей для детей)

А еще у меня есть отдельные статьи по поделкам из другого продного материала.

Удачных вам творческих идей.

Ольга Клишевская, специально для сайта Семейная Кучка.

Белка из шишек: поделка. Как сделать белку из шишек?

Дети очень любят работать с природными материалами. Поэтому после прогулки в сосновом лесу может получиться прекрасная белка из шишек. Поделка эта изготавливается различными способами. Здесь будут рассматриваться некоторые из них.

Инструкция по подготовке природного материала для поделки

Подобрать шишки для изготовления белочки процесс простой, но требующий внимательного взгляда. Казалось бы, чего проще: ходи по лесу, наслаждайся общением с природой и между делом собирай себе материал для рукоделия.

Однако следует помнить, что не все шишки одинаково подходят для творчества. Из гнилых и повреждённых, например, вряд ли получится что-то хорошее.

Не стоит отбраковывать шишки с неправильной формой, например, изогнутые, слишком короткие, сросшиеся. Наоборот, такие «уродцы» могут здорово пригодиться! Изогнутые шишки удачно превращаются в спинку зверька и его хвостик. Такой материал, как нельзя лучше подойдёт для труда. И вообще, собирать следует шишки разных размеров и форм. А уж как их можно использовать, подскажет фантазия.

Инструкция по подготовке природного материала для поделки

Да и по возвращении домой работа по подготовке материала ещё не всегда бывает закончена. Даже, можно так сказать, наступает самый ответственный момент.

Для того чтобы впоследствии получилась удачная белка из шишек – поделка, инструкция по подготовке природного материала гласит следующее.

Иногда фигурка зверька нужна срочно и ненадолго, например, для выставки. Тогда можно просто выбрать самые сухие и чистые шишки и приступать к работе.
Если же композицию хочется сохранить в первозданном виде на длительный срок, материал предварительно обрабатывают. Шишки следует перед работой опустить в монтажный прозрачный клей, а затем просушить. Тогда им не грозит время и тепло, от которых чешуйки раскрываются и поделка деформируется. Можно использовать с этой целью тёплый столярный клей.

Белочка из шишки и бархатного картона

Первым очень простым способом будет изготовление белки из одной шишки. Её устанавливают на подставку при помощи пластилина толстым концом вниз.

Из картона вырезают две детали: хвост и голову с ушками. На голову приклеивают глаза. Их можно купить готовыми в специальных магазинах для рукоделия или сделать из бусин, пуговиц, белой бумаги. Ещё на голову прикрепляют зубы – белые прямоугольники.

Хвост и голову нужно приклеить к шишке. Вот и получилась прикольная белка. Из шишек поделка может изменить свой объём под воздействием тепла. Однако в данном случае этот факт не испортит вещь.

Белка из шишек и пластилина

Это второй достаточно простой вариант изготовления фигурки лесного зверька. Дополнительно потребуется ещё оранжевый пластилин для того, чтобы получилась замечательная белка из шишек – поделка, сделанная малышом собственноручно. В качестве подставки подойдёт картонный квадрат.

Для работы следует выбрать парочку изогнутых шишек. Они будут служить туловищем и хвостом зверька. Соединять их следует выгнутыми сторонами при помощи пластилина. Если в запасе только одна шишка, то хвост можно вылепить из пластилина. Это будет толстая колбаска с заострёнными концами, изогнутая буквой «S».

Для головы следует вылепить овал оранжевого цвета. С одного конца его заостряют – это будет мордочка белки. Ушки оформляют из того же материала, сделав небольшие защипы в верхней части головы. На кончик носика крепится маленький чёрный шарик. Также в виде шариков делают глазки. Но можно воспользоваться покупными, с катающимися внутри зрачками.

Нижние лапки делают в виде двух половинок овала. Их срезами крепят к подставке, а уже на них устанавливается белка из шишек. Поделка станет считаться полностью готовой тогда, когда из пластилиновых колбасок будут приделаны передние лапки зверька. Их нужно крепить к верхней части туловища.

Белка – поделка из шишек и синельной проволоки

Сегодня для ручного труда в магазинах продают специальную ворсистую проволоку. По-другому её ещё называют синельной. Может получиться превосходная белка из шишек, если лапки, хвостик и ушки зверька выполнить из ворсистой проволоки.

Хорошо, если удастся достать специальные ворсистые шарики для головы. Тогда на него приклеивают глазки и носик из бусинок либо бисера. Иногда эти детали вырезают из бумаги или картона. Допускается использование мелких пуговичек.

Белочка с мордочкой из синель-проволоки

В некоторые наборы для ручного труда входят круглые ворсистые шарики. Из них получаются головы для зверьков. В противном случае, когда достать заготовку невозможно, используют ту же синельную проволоку, из которой делают лапки зверька.

Сначала нужно скатать «улиткой» кружок для одного глаза. Затем из проволоки выполняется петля, имитирующая носик белки. Потом мастер приступает к выполнению второго глаза. Его также делают «улиткой». Снизу под кончиком мордочки можно закрепить коротенький отрезок белой проволоки, согнутый пополам. Это будут зубки зверька-грызуна.

Это будет замечательная белка из шишек. Поделка, фото которой представлено здесь, выполнена как раз таким способом.

Мастер-класс «Белочки из шишек»

Иногда делают целую композицию, в которой присутствуют несколько зверьков. Одно животное будет, например, сидеть за задних лапках. А рядом примостится стоящая на всех четырёх конечностях белка из шишек. Поделка, мастер-класс которой можно просмотреть здесь, украсит полочку или комод. Можно её и преподнести в дар близкому человеку.

Так как сделать белку из шишек лучше всего с помощью синельной проволоки, то и материал этот нужно подбирать подходящий по цвету. Для каждого зверька следует ещё подготовить ворсистые шарики. Из них будут выполняться головы. Из чёрного пластилина вылепляются мелкие шарики – глазки, и детали покрупнее – пипочки носиков. Можно воспользоваться готовыми «глазами», которые продают в магазинах для рукоделия.

Итак, сначала на тонкий конец шишки крепят голову при помощи клея или пластилина. Если белка будет сидеть на задних лапах, то шишку ставят вертикально толстым концом вниз. Для той зверушки, которая стоит на всех четырёх конечностях, туловище устанавливают на подставке горизонтально.
Передние лапки делаются из синель-проволоки. Ею обматывают шишку между раскрывшимися чешуйками.
На голову приклеивают глаза.
Теперь при помощи пластилина устанавливают глаза.
Задние ноги можно сделать из половинок жёлудя.
Хвост же изготавливают либо из той же проволоки, либо из сосновой веточки, выкрашенной в коричневый цвет. Иногда его делают из пучка травы, связав его снизу нитками.

Теперь, когда всем понятно, как сделать белку из шишек, можно составлять композицию. Для этого используют пластилиновые грибочки, из веточек сооружают деревца. А можно и вовсе построить белочкам чудный домик, сложив их из «брёвнышек» — наломанных веточек.

Белочка-пирамидка из шишек

Более опытные мастера изготавливают зверька, составляя его туловище из нескольких шишек. Фигурка собирается подобно пирамиде: внизу круглая широкая деталь, далее устанавливается подлиннее и поуже. Третьей крепится самая маленькая круглая шишечка – голова. Получается более похожая на настоящего живого зверька белка из шишек. Поделка пошагово выполняется в такой последовательности.

Оформляют голову, на которую приклеивают глаза и нос.
Ушки делают из чешуек другой шишки либо из семян клёна – «ветролётиков».
На пластилиновую горку устанавливают шишку, имитирующую нижнюю часть туловища. Она, как говорилось выше, широкая и короткая, почти круглая.
Ко второй шишке прикрепляют передние лапки. Их можно вылепить из глины либо пластилина. Некоторые мастера изготавливают эти конечности из чешуек другой шишки. Но и синель-проволока здесь будет уместна.
К нижнему основанию туловища крепят верхнюю часть. Это шишка более узкая и длинная. Её устанавливают утолщённым концом вниз.
Готовую голову крепят на вторую шишку горизонтально.
В последнюю очередь устанавливают хвост. Для него нужна шишка самая крупная и по возможности хорошо раскрывшаяся.
Можно использовать для хвоста половинку шишки, которую нужно разрезать вдоль. Придав «хвостику» нужный изгиб, его фиксируют клеевой массой.
Для того чтобы поделка была более прочной, сцепление деталей в ней можно производить не пластилином, а кусочками металлической жёсткой проволоки. Предварительно в местах соединения следует просверлить отверстия, в которые и вогнать стерженьки. Если к тому же углубления заранее залить клеем, то детали соединяться очень прочно.

Белка из шишек: поделка. Как сделать белку из шишек?

Инструкция по подготовке природного материала для поделки

Иногда фигурка зверька нужна срочно и ненадолго, например, для выставки. Тогда можно просто выбрать самые сухие и чистые шишки и приступать к работе.
Если же композицию хочется сохранить в первозданном виде на длительный срок, материал предварительно обрабатывают. Шишки следует перед работой опустить в монтажный прозрачный клей, а затем просушить. Тогда им не грозит время и тепло, от которых чешуйки раскрываются и поделка деформируется. Можно использовать с этой целью тёплый столярный клей.

Белочка из шишки и бархатного картона

Белка из шишек и пластилина

Белка – поделка из шишек и синельной проволоки

Белочка с мордочкой из синель-проволоки

Мастер-класс «Белочки из шишек»

Итак, сначала на тонкий конец шишки крепят голову при помощи клея или пластилина. Если белка будет сидеть на задних лапах, то шишку ставят вертикально толстым концом вниз. Для той зверушки, которая стоит на всех четырёх конечностях, туловище устанавливают на подставке горизонтально.
Передние лапки делаются из синель-проволоки. Ею обматывают шишку между раскрывшимися чешуйками.
На голову приклеивают глаза.
Теперь при помощи пластилина устанавливают глаза.
Задние ноги можно сделать из половинок жёлудя.
Хвост же изготавливают либо из той же проволоки, либо из сосновой веточки, выкрашенной в коричневый цвет. Иногда его делают из пучка травы, связав его снизу нитками.

Белочка-пирамидка из шишек

Оформляют голову, на которую приклеивают глаза и нос.
Ушки делают из чешуек другой шишки либо из семян клёна – «ветролётиков».
На пластилиновую горку устанавливают шишку, имитирующую нижнюю часть туловища. Она, как говорилось выше, широкая и короткая, почти круглая.
Ко второй шишке прикрепляют передние лапки. Их можно вылепить из глины либо пластилина. Некоторые мастера изготавливают эти конечности из чешуек другой шишки. Но и синель-проволока здесь будет уместна.
К нижнему основанию туловища крепят верхнюю часть. Это шишка более узкая и длинная. Её устанавливают утолщённым концом вниз.
Готовую голову крепят на вторую шишку горизонтально.
В последнюю очередь устанавливают хвост. Для него нужна шишка самая крупная и по возможности хорошо раскрывшаяся.
Можно использовать для хвоста половинку шишки, которую нужно разрезать вдоль. Придав «хвостику» нужный изгиб, его фиксируют клеевой массой.
Для того чтобы поделка была более прочной, сцепление деталей в ней можно производить не пластилином, а кусочками металлической жёсткой проволоки. Предварительно в местах соединения следует просверлить отверстия, в которые и вогнать стерженьки. Если к тому же углубления заранее залить клеем, то детали соединяться очень прочно.

О хорошем урожае шишек белки узнают заранее

Давая время от времени необычайно высокий урожай семян и плодов, растения стараются «обмануть» животных, потребляющих эти семена и плоды, и таким образом обеспечить свое возобновление. Но обыкновенные белки — и американские, и европейские — распознают обман и в годы, когда наблюдается очень большой урожай шишек, производят на свет больше потомства, которое может этим урожаем воспользоваться.

Наверное, многие замечали, что иногда выдаются годы, когда на елях или соснах образуется очень много шишек, на рябинах — ягод, а на дубах — желудей. Явление «урожайного» года, когда многолетнее растение вдруг приносит семян и плодов гораздо больше, чем обычно, во многом загадочное и трудно предсказуемое («неурожай» предсказать легче — как правило, это следствие особо неблагоприятных погодных условий во время цветения растений или завязывания плодов).

Образование в отдельные годы необычайно большого числа семян связано для растений с немалыми затратами (к примеру, скорость прироста деревьев в такие годы снижена), а значит, в этой стратегии «пульсирующего» плодоношения, скорее всего, есть какой-то биологический смысл: есть что-то, приносящее растению реальную выгоду. Многие исследователи полагают, что смысл состоит в том, чтобы «обмануть» животных, регулярно питающихся семенами этих растений и потому обычно сильно ограничивающих их возобновление.

Если же семян и плодов образуется очень много неожиданно, то животные не способны все их съесть. И хотя в ответ на хорошее питание у этих животных, скорее всего, на следующий год возрастет плодовитость, а в текущий год увеличится выживаемость молодых особей, к существенному увеличению численности и возрастанию потребления корма это не приведет. Количество съеденных семян в урожайный год, конечно, будет больше обычного, но только за счет увеличения рациона имеющихся животных, а не за счет появления «новых ртов». Значительная часть семян останется несъеденной и, соответственно, сможет дать начало большому количеству проростков на следующий год.

С точки зрения животных — потребителей семян, хорошо бы растение «обмануть», то есть заранее узнать о предстоящем большом урожае корма и произвести на свет больше детенышей, которые успеют этим лишним кормом воспользоваться. Удивительно, но обыкновенные европейские белки (Sciurus vulgaris), также как их близкие родственники — североамериканские красные белки (Tamiasciurus hudsonicus) — обладают такой способностью. В статье, опубликованной в последнем номере журнала Science за прошлый год, группа исследователей из Канады, Италии, Бельгии и США показала, что белки в урожайные годы (имеется в виду высокий урожай семян белой ели в случае североамериканской красной белки и высокий урожай семян сосны, желудей дуба или орешков бука в случае европейской белки) дают дополнительное потомство, а выживаемость молодых зверьков в такие годы оказывается выше обычного.

Важно подчеркнуть, что белки начинают производить больше детенышей не в ответ на увеличение количества имеющегося корма, а до него — так, чтобы подросшие бельчата, перешедшие в своем питании с материнского молока на растительный корм, могли воспользоваться высоким урожаем того же года! При этом самки белок начинают ожидать следующего приплода, когда еще кормят молоком детенышей предыдущего выводка (обычно же у млекопитающих в период лактации понижена вероятность успешной овуляции).

Спрашивается, как же белки узнают о том, что в этом году будет много семян? Однозначного ответа на этот вопрос пока нет, но скорее всего, сигналом служит появление уже в начале лета цветочных почек, мужских (дающих пыльцу) шишек на хвойных деревьях (а у сосен новые шишки закладываются еще раньше — осенью) и других признаков, связанных с состоянием растения. Цветочные почки и молодые шишки также потребляются белками, и, хотя энергетическая ценность их невысока по сравнению с семенами, они могут содержать какие-то вещества, служащие для белок сигналом о том, что скоро будет много корма и целесообразно к этому времени произвести на свет побольше детенышей.

Надо также отметить, что значимой корреляции между урожаем семян в предыдущий год и рождаемостью белок на следующий год не обнаружено. Белки знают, когда надо размножаться, а когда не надо.

Источник: Stan Boutin, Lucas A. Wauters, Andrew G. McAdam, Murray M. Humphries, Guido Tosi, André A. Dhondt. Anticipatory reproduction and population growth in seed predators // Science. 2006. V. 314. P. 1928-1930.

Алексей Гиляров

четыре интересных факта. Как ещё проходит подготовка к зиме

Я полюбила этих зверьков ещё с детства. Меня часто вывозили в Кисловодск, где я не только наблюдала за жизнью этих животных в парке, но и фотографировалась с ними и кормила вкусными семечками, которые продавали местные бабушки. Как только похолодало, мне что-то вспомнились эти милые существа. Я уверена, что вам будет интересно узнать больше об этих животных.

Как белка готовится к зиме

Больше всего белке важно найти еду , ведь она не сможет искать пропитание под слоем снега. Ничего не остаётся, как делать заначки уже с осени , а то и с лета, ведь это на самом деле поможет пережить зимнее время года. Заначка делается из:

желудей;
орехов;
грибов;

Зверёк ищет жёлуди и орешки , а потом прячет их в дупло. Это животное очень любит кедровые орехи . Белка заранее чистит шишку, чтобы достать зёрна и спрятать их от посторонних глаз. Когда тайник готов, то зверьки заметают следы, чтобы никто не подобрался к их припасам . Они поправляют траву и разглаживают мох, который мог немного примяться. Случается, что белочка настолько хорошо ныкает припасы, что потом сама не может их отыскать.

Животное обязательно запасает грибы , которыми отлично питается зимой. Белка тщательно их сушит, развешивая на ветке дерева. Это нужно для того, чтобы грибы не испортились. Как только они полностью будут высушены, то белочка прячет их.

Как ещё проходит подготовка к зиме

Задолго до того, как наступят холода, зверёк обязательно тщательно утепляет свой дом. Все щели закрываются при помощи мха, клоков шерсти или сухой травы. Если стоит лютый мороз, то белка не будет вылезать из своего убежища. Она предпочитает немного поспать, свернувшись в калачик. Зверёк чувствует себя в полной безопасности в дупле.

Перед наступлением холодов происходит линька . Рыжая шубка меняется на серую. В зимнее время шерсть белки более густая, чем летом. Это отлично помогает пережить холода. Стоит отметить тот факт, что серая шуба не так сильно заметна , что отлично помогает белке прятаться от хищников. Она может легко сливаться с деревом.

Как люди помогают белкам

Человек часто помогает этому животному выжить в неблагоприятное для него время года. Люди подкармливают этих зверьков, устанавливая различные кормушки. В них кладут семечки или орешки. Белка сможет перекусить ими в любое время. К слову, они очень любят кормёжку, которую сделал неравнодушный человек.

Зима в наших лесах — время суровое и негостеприимное. Низкие температуры и малое количество пищи приводят к тому, что многие лесные обитатели не доживают до весны. Вы знаете, например, как к зиме готовится маленький зверек очень активен и потому особенно нуждается в большом количестве питательных веществ.

В отличие от прочих обитателей леса белки в спячку не впадают. Но это совсем не значит, что они не готовят себе теплое и надежное укрытие от зимних холодов. Как правило, в роли такового выступает дупло или расщелина в дереве.

Зверек выстилает его мхом и собственной шерстью, создавая толстую подушку. Но как к зиме готовится белка по части продовольствия? Ведь доставать корм из-под снега она не сможет.

Именно поэтому белка и делает впечатляющие запасы. Она в больших количествах прячет орехи, желуди и семена злаковых растений, «фасуя» их по дуплам и укромным развилкам деревьев.

Особенно ценят белки кедровые орехи, так как при небольшом объеме они отличаются высокой пищевой ценностью. Так как белка готовится к зиме очень тщательно, за ее припасами порой идет настоящая охота, так что она вынуждена хорошенько маскировать свои тайники.

Необходимо отметить, что свои припасы этот зверек прячет настолько хорошо, что порой сам не может их отыскать. Так в лесу появляются новые дубы и ели: семена из забытых припасов прорастают, давая жизнь новому поколению деревьев.

Помните иллюстрации к детским сказкам, в которых нарисовано беличье дупло, а вокруг него развешены высушенные грибы? Так вот, белки и в самом деле так делают. Съедобные грибы они просто накалывают на подходящие сучки, а после сушки прячут их в тех же тайниках. Как правило, запасы белки на зиму включают в себя много этого ценного продукта. Сухие грибы не только питательны, но и занимают мало места.

Как мы уже говорили, убежищем на случай сильных холодов служит дупло. Но не следует думать, будто белка ограничивается лишь тем, что настилает на его дно шерсть и мох. Работа ее перед наступлением холодов тяжела: животное полностью проконопачивает все щели, по всему лесу ищет подходящие клочки шерсти и пуха. Если морозы особенно сильны, то она даже не выходит из убежища, проводя все свое время в теплом и надежном дупле.

Но как к зиме готовится белка, кроме собирания припасов? Важной частью этого процесса является линька: она скидывает свою яркую летнюю шубу, меняя ее на более подходящий серый «камуфляж», который намного лучше маскирует зверька на фоне Это очень важно: так как «мелочь» вроде мышей и хомяков остается глубоко под снегом, совы, хори, куницы и прочие хищники переключаются на белок.

Не в последнюю очередь именно зимой резко сокращается число слишком молодых и слишком старых животных, ослабивших свое внимание и попавших в когти хищников.

Нужно сказать, что выживанию этих милых существ в суровое зимнее время сильно помогает человек, устанавливая в лесу кормушки. Если случается неурожай, то такая подкормка — единственный шанс белки на выживание, так как в противном случае ей просто не хватит припасов.

Вот вы и узнали, как к зиме готовится белка: процесс этот довольно непрост, и животному приходится много работать.

Здравствуйте ребята! Какое время года к нам приближается? Правильно, зима! Сейчас у нас поздняя осень и мы готовимся к зиме, правильно? А как мы, люди, можем к ней подготовиться? (Мы покупаем тёплые вещи, приготавливаем на зиму заготовки, утепляем свои дома, затыкаем окна итд.). Ребята, а вы знаете, что звери, живущие в лесах, готовятся к зиме почти также как и мы! Они тоже делают съедобные запасы, утепляют свои норки, меняют свою летнюю шкурку на зимнюю, а некоторые животные вообще всю зиму проводят в глубоком сне! Сегодня мы и поговорим с вами как разные животные готовятся к приходу зимы. Что-то расскажите вы мне, а что-то и я вам!
Первое животное, о котором мы с вами сегодня поговорим это- хозяин всех лесов- медведь. Что вы знаете о нём? (ответы детей)
Основную пищу медведя составляют ягоды, орехи, корни, луковицы, муравьи, личинки жуков и рыба. Этим он накапливает жировой слой к зиме. Бурые медведи устраивают себе берлогу в потаённом, малодоступном месте. Чаще всего- под корнем вывороченного дерева или в буреломе. В ноябре медведи забираются туда и погружаются в сон. Спят медведи беспокойно. Если их что-то потревожит, они могут бросить берлогу и соорудить другую. В берлоге у медведицы рождаются медвежата, обычно 1-2, редко 3. Они очень маленькие, размером с рукавицу. Мама медведица кормит их молоком 8 мес. и даже тогда, когда она спит зимой.

Следущее животное про которого мы поговорим это- рысь. Рысь в спячку не впадает. Среди всех представителей семейства кошачьих рысь лучше всего приспособлена к холодам. Она великолепно передвигается по глубокому снегу, лазает по деревьям. Любимая добыча рысей- зайцы, тетерева, рябчики. Иногда она нападает на детёнышей кабанов, в голодную зиму она может прокормиться и мелкими грызунами. Зимой особенно достаётся от рыси лосям, когда этим длинноногим животным трудно передвигаться по глубокому и рыхлому снегу. К зиме шерсть у рыси становится густая, пушистая и мягкая, а лапы рыси сильно опушены, чтобы не чувствовать холода.

Заяц. Как мы знаем перед наступлением зимы заяц меняет серую шкурку на белую. Питаются зимой они корой, мелкими веточками осины, ивы, берёзы. Зимой поваленное дерево может стать настоящей заячьей столовой, куда зверьки наведываются каждый день, пока не обгрызут всю кору. Постоянного жилища у них нет. В сильные холода прячутся они под заснеженными кустами.

Ёж. К холодам ежам надо накапливать жир, а осенью у ежей мало добычи. Черви прячутся в землю, Скрываются юркие ящерицы. Трудно находить жуков и лягушек. В ясные осенние дни ёж готовит себе тёплое гнездо для зимовки. Ночью и днём таскает в нору сухие листья и мягкий лесной мох. В зимней спячке ёж проводит более шести месяцев. В это время он ничего не ест и не двигается. Спит он свернувшись клубком, в логове, под глубоким сугробом, как под толстым, пушистым одеялом. И спит он так всю зиму, до весеннего солнышка.

Белка. Многие грызуны также делают зимние запасы. Белкам, которые спят зимой только в очень сильные морозы, запасы необходимы капитальные. В отличие то многих других животных, белки пользуются своими запасами сообща. Осенью они прячут жёлуди и орехи в лесную подстилку, в дупла, землю. Достать от туда их может не только сама хозяйка, но и любая другая белка. Грибы они тоже запасают особым способом: нанизывают их на ветки деревьев или рассовывают в развилки между веток. К зиме шубка у этого зверька становится очень мягкая и пушистая, а цвет сероватым. Своё гнездо она сооружает на высоких елях или соснах. Внутри гнезда- мягкая трава, мох, комочки шерсти. В сильные морозы белка не вылезает из своего дупла, может даже и уснуть.

Лисы и волки. Эти хищники конечно не спят. К зиме у этих зверей шерсть становится более густая. Зимой волки объединяются в крупные стаи. Их жертвами становятся кабаны, зайцы, косули. А лисы нападают на более мелкую живность- зайцы, мелкие грызуны, птицы. Норы роют обычно в рощах, на склонах холмов и оврагов.

Бобры. Осенью семейство бобров занято заготовкой корма. В одиночку, а иногда и вдвоём, бобры легко валят осину и иву. Строят они себе прочные хатки. Вход в неё всегда устроен под водой, чтобы враг не подобрался. Зимой внутри бобриного жилища тепло, температура плюсовая.

Хомяки. С приближением осени хомяки начинают активно устраивать кладовые- готовится к зиме. А большинство устраивают их прямо во рту, куда прячут корм за щеки. Эти животные по праву считаются самыми запасливыми.

Лось. Живут они в лесах. Ближе к осени, когда поспевают ягоды брусники и черники лоси любят полакомиться ими прямо с веточками, также любит и грибы, даже ищет их специально. Зимой лось гложет кору осины, рябины и ивы. В конце осени он сбрасывает свои рога, а к весне у него отрастают новые. Постоянного жилища они не готовят. Трудно приходится им зимой, когда снежный настил очень глубокий, ведь перебираться по нему с такими длинными ногами не легко.

Лесные мыши, полёвки. Все они очень прожорливы, запасаются семенами и ягодами. Зимой, когда всё вокруг засыпает снегом зверьки роют ходы в сугробах, а так же могут жить и в стогах сена и постройках.

Викторина «Как зимуют звери»

1. Что делают звери, чтобы уберечься от холода?
— улетают в тёплые края
— меняют шубку летнюю на более тёплую и светлую зимнюю
— меняют шубку летнюю на более тёплую и яркую зимнюю

2. Какой зверь зимой не меняет шубки?
— белка
— заяц
— ёж

3. А кто ещё из зверей всю зиму спит?
— барсук
— лисица
— волк

4. Что в первую очередь необходимо зверям, впадающим в спячку?
— Жировые запасы под шубкой
— тишина
— покой

5. Заяц жировых запасов не имеет. Чем он зимой питается?
— Корой деревьев и веточками
— морковкой
— капустой

6. Что едят зимой хищники: волки и лисицы?
— кору деревьев и веточки
— мелких зверьков
— голодают

Кто здесь лишний?

Наевшись вдоволь за лето, медведи, барсуки, мыши и ежи в начале зимы впадают в спячку.
(Мыши зимой не спят, а не видно их потому, что они передвигаются под снегом. Зато лисы всегда знают где мышь, чуют ее через сугроб)

В поисках добычи рыщут по заснеженному лесу волк, лиса и лось.
(Лось не хищник. Он, как и все копытные травоядный, а когда свежей травки нет, он ест ветки и прошлогоднюю траву)

Лоси, кабаны, ласки, зайцы и косули зимой питаются ветками, корешками, корой растений и свежими листочками.
(Ласки- хищники, ловят мышей и птиц. А свежих листочков зимой в лесу к сожалению нет, так что им приходится трудно)

Ну молодцы ребята! Всё верно мне рассказали! Ну а сейчас я покажу вам мультфильм!

1. Делая запасы, белки приносят пользу деревьям. Как известно, многие белки закапывают желуди в землю, чтобы впоследствии их выкопать и съесть. Так, например, одна каролинская белка способна создавать несколько тысяч таких тайников с желудями каждый год. Впрочем, немногие из них она потом сможет отыскать. Подобная ситуация благоприятно влияет на деревья. Белки собирают желуди в основном под дубами, а хоронят их вдалеке от них. Таким образом, белка помогает растению расселяться на большие расстояния.

2. Делая запасы, белки могут также навредить деревьям. Так, например, красные белки и белки Дугласа, распространенные в Северной Америке, питаются в основном семенами из сосновых шишек. Эти белки либо поедают найденную пищу немедленно, либо запасают её в тайниках в самих деревьях. Обычно в таких «кладовых» слишком сыро, и у семян мало шансов на то, чтобы прорасти. Белкам такое место для запасов позволяет почти всегда оставаться сытыми в холодное время года, однако деревья получают меньше шансов на воспроизведение.

Стоит также отметить, что в исследовании, опубликованном в 1995 году в журнале International Journal of Organic Evolution, говорится, что деревья выработали способы «борьбы» с подобным поведением белок. Так, в Скалистых горах Северной Америки, где распространены красные белки, шишки сосны мягкой имеют семена с более толстой оболочкой и покрыты большим количеством смолы. Это делает их менее доступными для белок. Кроме того, исследователи обнаружили также, что в этих шишках гораздо меньше семян, чем у сосен этого же вида в других местах, и они имеют меньшую питательную ценность.

3. Белки сушат грибы на зиму. Одна из составляющих рациона красных белок – грибы. Иногда они вешают их между веток на деревьях, чтобы их можно было съесть зимой. Также в таких грибах реже заводятся личинки насекомых и нематоды.

4. Белки разбираются в «садоводстве» и хорошо знают то, что они едят. Так, серые белки отличают желуди красного дуба от белого и хранят каждые определенным образом. Поскольку желуди белого дуба прорастают почти сразу, как они попали в землю, то белки едят их немедленно, поскольку проросшие желуди теряют свою пищевую ценность. В то же время желуди красного дуба не прорастают до весны, поэтому белки предпочитают зарывать их для зимних «перекусов». А в 1996 году в журнале Animal Behavior было опубликовано исследование, согласно которому некоторые белки прокусывали зародыши желудей белого дуба, чтобы те не прорастали, и зарывали их в землю подобно желудям красного дуба. Более того, ученые были свидетелями того, как белки выкапывали некоторые желуди красного дуба, которые они, вероятно, не собирались есть зимой, прокусывали их зародыши и закапывали вновь для хранения до следующей зимы.

Белка Шишка — rrrrrrr

Оказалось, что у него все как у маленьких детей: газики, колики и вообще пищеварение, которое не справляется с едой. Потом мы постепенно начали добавлять в его рацион по одному продукту. Белка, оказывается, развивается очень быстро. В одно утро он буквально за минуту сожрал желудь, который до этого даже не мог разгрызть. Хотя, возможно, ему еще нельзя было его есть.

После того как Шишка съел этот желудь, он начал вылезать из своего пледа и трястись. Потом начал икать. Я сразу написала Анне, она ответила, что это очень плохо. Мы обе забеспокоились.

Анна предположила, что он мог простыть в этой луже и у него началась пневмония. У бельчат это очень частое явление. Они до последнего бегают, а потом раз — и умирают. Я звоню в ближайший к нашей даче город, узнаю, в какой клинике есть рентген, и мы с Шишкой едем туда.

В дороге он начал истерить. Анна мне сразу сказала, что белки очень умные, они запоминают команды. «Если вы часто ездите, вам нужно сразу одной командой приучить его, что вы куда-то едете. Например, на дачу. Говорите ему „Дача, дача, дача“». И вот мы едем в машине, я ему все время повторяю: «Дача, дача, дача». Сейчас мы уже раз пять съездили туда-обратно, и он реально понимает, что такое «дача, дача».

Мы приехали на этот рентген, оказалось, что у них нет рентгенолога и некому его делать. Я звоню Анне, говорю: «Я сейчас сама буду делать ему рентген, как его держать?»

Она мне подробно рассказала, как правильно разложить и держать бельчонка на рентгеновском столе. А передо мной стоит какой-то ветеринар. Я его спросила, делал ли он когда нибудь мышке или котеночку рентген, он ответил: «Нет». И мне пришлось рассказать ему, как делать рентген белке.

Посмотреть наш рентген там тоже было некому. В этой клинике я их всех чуть не убила. Потому что если бы они сразу по телефону мне сказали правду, я бы просто к ним бы не поехала. Я отправила Анне снимок, а она перенаправила его какому-то врачу в Белоруссии. Оказалось, что на снимке с легкими у него все более-менее нормально. Но у него все пузо в газах, даже видно куски желудя, который он тогда сожрал.

К вечеру Шишка задышал еще тяжелее, я начала думать, вдруг этот врач из Белоруссии ошибся. Анна посоветовала мне ехать в Москву в клинику. А еще она сказала, что у него, видимо, спазм и ему нужно сделать укол. Я собралась, набрала шприц, сижу с этой иголкой и начинаю реветь взахлеб. Я раз попробовала, два, но никак не смогла его уколоть.

Поделка «Белка» из шишек

Поделки из шишек поражают разнообразием замыслов, ведь из этого подручного материала можно создать как очень сложные композиции, так и предельно простые, с которыми справится даже ребенок. Именно простую и удивительно изящную идею рассмотрим в мастер-классе «Белка из шишек». Такую поделку вполне можно собрать за 20 минут, если заранее подготовить все необходимые материалы.

Для работы понадобится:

сосновая шишка округлой формы;
большой помпон для головы;
маленький помпон для носика;
пластиковые глаза;
гладкая синельная проволока;
фигурная синельная проволока;
деревянная бусина;
клей;
ножницы или кусачки.

Для начала подберем шишку средних размеров. Она должна быть достаточно плотной и иметь округлую форму, чтобы поделка белка из шишки получилась пузатенькой и симпатичной. Важно убедиться, что в найденной шишке не живут насекомые и что она хорошо просохла, иначе поделка быстро потеряет свою внешнюю привлекательность. Первым шагом будет соединение тельца белочки с головой. Выберите такой помпон, который будет соответствовать по размеру шишке (в нашем случае диаметр составляет 2,5 см) и приклейте его к верхушке.
Когда клей подсохнет, и голова будет надежно зафиксирована, можно приступать к созданию мордочки. Приклеиваем глазки и носик. Белка из шишек, сделанная своими руками, получится особенно забавной, если подыскать двигающиеся глазки, но вполне подойдут и простые пластмассовые или даже бумажные. Носиком послужит маленький черный помпончик, подходящий по размеру (в представленном мастер-классе диаметр меньшего помпона 0,5 см).
Теперь белка из шишки станет обладательницей очаровательных ушек. Для этого берем гладкую синельную проволоку и нарезаем 2 отрезка каждый длиною 2,5 см. Каждый кусочек складываем острым уголком, чтобы получилась V-образная форма, и приклеиваем на макушку белочки. С материалом для ушек можно экспериментировать и использовать, к примеру, фетровую ткань или клеенку.
Теперь переходим к формированию пушистого хвостика белочки. Для этого понадобится уже фигурная синельная проволока. Отрезаем два фрагмента, в каждом из которых овальная фигура повторяется дважды, каждый из отрезков сгибаем посередине, концы основания скручиваем между собой.
Далее скрученной частью синельной проволоки к шишке приклеиваем хвост и придаем ему беличью форму. Например, кокетливо загибаем кончик поднятого хвоста вниз, а у основания делаем прогиб.
Пришел черед задних лапок белки. Снова берем гладкую синельную проволоку, на этот раз отрезаем кусочки приблизительно по 5см каждый, загибаем плавной линией и приклеиваем спереди под шишку.
Для передних лапок также берем два отрезка гладкой синельной проволоки длиною по 4-5 см и каждый приклеиваем только одним концом к тельцу белки из шишки. Красивой линией загибаем лапки-ручки вперед.
Остался завершающий штрих – чтобы порадовать лакомством нашу белочку, поместим ей в лапки желудь. Можно найти настоящий желудь, а можно сделать его самостоятельно своими руками. Берем крупную деревянную бусинку, продеваем в дырочку и подклеиваем кусочек синельной гладкой проволоки. Оборачиваем проволоку вокруг верхней части бусины, вклеиваем самодельный желудь в лапки белочки и любуемся результатом.

Такая белка из шишек – поделка, которая не займет много времени, но зато доставит массу удовольствия. Пофантазируйте, создав целое семейство пушистых лесных зверьков, мишек, ежиков, сов, придумайте им украшения в виде жилеток или бантиков и поселите их в собственном домике!

МОЗГ Сверху ВНИЗ

Два вида фоторецепторов в сетчатки позвоночных — палочки и колбочки — различаются во многих отношениях, как анатомически, так и функционально.Главное отличие это противоположные роли, которые они играют в видении. Стержни обеспечивают то, что называется скотопическим зрением: они очень чувствительны к низким уровням света, но не может различать цвета. Колбочки обеспечивают фотопикс. видение: они требуют яркого света, но позволяют нам видеть мир вокруг нас по цвету, и острее.

Однако в обоих случаях нервная реакция одинакова — гиперполяризация. фоторецепторных клеток — и инициируется То же явление: поглощение световой энергии фотопигментами встроены в диски внешних сегментов фоторецепторов.В стержнях фоточувствительным пигментом является родопсин, который имеет пиковую чувствительность около 500 нанометров (нм) в видимый световой диапазон электромагнитного спектра.

В конусах, светочувствительный пигмент — опсин, а трансмембранный белок, очень похожий на родопсин. Опсин бывает трех различных разновидностей, отличающихся друг от друга: различия в их аминокислотных последовательностях, которые приводят к различия в их кривых поглощения света, с пиками в синей, зеленой и красной частях видимого света спектр соответственно.

Все три разновидности опсина присутствуют во всех колбочках. Но есть три типа конусов, в каждом из которых разные в значительной степени преобладает разновидность опсина, что делает его более чувствительным к другой части цветового спектра, как показано на диаграмма здесь. «Синий» колбочки, содержащие в основном опсин, чувствительный к синему, возбуждаются в основном длиной волны около 420 нм, «зеленый» колбочки длиной волны около 530 нм, а «красные» колбочки длиной волны около 560 нм.

А вот прикрепление названий цветов к шишкам может ввести в заблуждение, потому что колбочки не являются максимально чувствительными точно в красной, зеленой и синей частях спектра. Как вы видете на картинке выше синие колбочки наиболее чувствительны к фиолетовому, и красные колбочки в желто-зеленой части спектра. Как следствие, точнее будет относиться к трем типам конусов, содержащих в основном пигмент, чувствительный к синему, зеленому и красному цвету, в виде S-колбочек, M-колбочек, и L-конусы, соответственно, где S, M и L обозначают короткие, средние, и длинноволновый.

Следовательно, объект, цвет которого попадает в любую часть видимого спектра, будет возбуждают в разной степени все три типа колбочек. Например, зеленый объект будет стимулировать зеленые шишки по большей части, но также и красные шишки в меньшей степени. протяженность, а синие конусы — еще меньшую. Таким образом, наше восприятие цветов зависит от этого наложения различных спектров поглощения трех виды шишек, и в последствии, конечно же, по сложным нейронные взаимодействия между сетчаткой и остальной частью мозга.

Дальтонизм , или дальтонизм, — дефект зрения, характеризуемый невозможностью различать определенные цвета или оттенки. Его название происходит от имени английского физика Джона Далтона. (1766-1844), который сам страдал этим заболеванием.

Около 8% всех мужчин в той или иной степени страдают дальтонизмом, и чуть менее 1% всех женщин.Причина такой разницы заключается в том, что основная форма дальтонизма является наследственной, и вызывающие его генетические мутации происходят на Х-хромосоме. Поскольку мутировавший ген рецессивен, женщины, у которых есть два X хромосомы, могут нести ген без дальтонизма, если другая Х-хромосома не затронута. Но у мужчин есть только одна Х-хромосома, поэтому, если на ней присутствует мутировавший ген, они автоматически дальтоники.

Случаи полной дальтонизма, известной как ахроматопсия, в которых кто-то видит мир только в оттенках серого, очень редко. Обычно у людей с дальтонизмом возникают проблемы в отличии красного от зеленого или, что гораздо реже, синего от желтый.

Классическая дальтонизм к красному / зеленому цвету — результат отсутствия красных колбочек в сетчатке. Формы дальтонизма обычно классифицируются по типу пораженного конуса.Таким образом, там три вида дальтонизма, соответствующие трем виды шишек. Слепота к зеленому из-за недостатка зеленый пигмент, называется дейтеранопией и является наиболее распространенным форма.

Адаптация к темноте — это двухэтапный процесс в котором глаза переходят от фотопического (конусообразного) на скотопическое (стержневое) зрение.После того, как вы потратили определенное количество времени в хорошо освещенной комнате, светочувствительность ваших глаз порог очень высокий. Если вы перейдете в темную комнату, этот порог быстро падает в течение первых 5-6 минут, тогда кажется, что он собирается стабилизироваться асимптотически. Но примерно на 7-й минуте порог начинает даже падать более. Примерно через полчаса он достигает второй асимптотики. уровень, намного ниже, чем первый.Этот минимальный уровень является порог скотопического зрения, тогда как начальный уровень представлял порог для фотопического зрения.

КАК ПОЛУЧАЕТ СВЕТ ПРЕВРАЩАЕТСЯ В НЕРВНЫЕ ИМПУЛЬСЫ

Трансдукция световой энергии в вариации мембраны фоторецепторов потенциал начинается с поглощения фотонов светочувствительными пигментные белки в дисках внешних фоторецепторов. сегменты.Эти пигментные белки принадлежат к семейству известных как opsins . Пигментный белок в палочек называется родопсин , а пигмент Белок в шишках называется иодопсин . А один стержень может содержать до 100 миллионов молекул родопсина в его внешнем сегменте дисков.

молекул родопсина содержат семь трансмембранных доменов. и чем-то напоминают метаботропные синаптические рецепторы в их структуре.На самом деле родопсин можно рассматривать как рецепторный белок, агонист которого уже привязан к нему. Этот агонист представляет собой молекулу под названием ретинен (или сетчатка), полученный из витамина А. Он обязан середина седьмого трансмембранного домена родопсина молекула. В частности, это форма 11 -цис . ретинена, который при поглощении света изомеризуется в форма all -trans .Эта изомеризация превращает родопсин до его активной формы, метародопсина II. Этот реконфигурация молекулы ретинена, таким образом, производит такой же эффект, как если бы нейромедиатор внезапно связал к рецептору.

Далее, метародопсин II стимулирует определенный G-белок. называется трансдуцин.Нравиться все G-белки, трансдуцин затем активирует другой фермент, в данном случае фосфодиэстераза (ФДЭ). Когда PDE активирован, он преобразует имеющийся cGMP в цитоплазме стержня при отсутствии света в регулярный GMP. В результате снижение цГМФ закрывает натриевые каналы. в клеточной мембране стержня, таким образом, гиперполяризуя клетку.В результате меньше нейромедиатора (скорее всего, глутамата) молекулы высвобождаются из синаптических концовки.

Обратите внимание, что усиление сигнала происходит в двух точках в это биохимический каскад. Каждая молекула метародопсина II активирует около 100 молекул G-белка и каждую фосфодиэстеразу молекула гидролизует около 1000 молекул цГМФ в GMP.Именно это явление усиления позволяет стержням для обнаружения наличия одиночного фотона света.

Витамин А, который производит наш организм из бета-каротина во многих продуктах, которые мы едим (в том числе, наиболее известный как морковь) необходим для синтеза ретинена. связаны с центром молекулы родопсина. Действительно, суровая Дефицит витамина А ухудшает ночное зрение из-за меньшего количество производимого ретинена.Однако в дневное время обычно достаточно света, чтобы позволить относительно нормальный зрение, несмотря на низкий уровень зрительных пигментов.

Белок в рожках мороженого

База данных продуктов и счетчик калорий

Лучшим выбором для термина «Конусы мороженого» является 1 рожок и один дип рожка для мороженого у которого около 3.1 грамм протеина . Ниже показано количество белка для различных видов и размеров порций мороженого.

Просмотрите другие значения пищевой ценности (например, калорий, углеводов или жиров) с помощью фильтра ниже:

увидеть больше результатов для рожков мороженого

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Очистка внешнего сегмента колбочки для протеомного анализа его мембранных белков сетчатки карпа

Чистота каждой из мембран OS и IS

В этом исследовании мы первоначально намеревались идентифицировать растворимые и связанные с мембраной белки, специфически или преимущественно экспрессирующиеся в OS колбочек. Было бы идеально обнаруживать белки, экспрессируемые в очищенной ОС колбочки, и сравнивать их с белками, экспрессируемыми в IS колбочек, OS стержней и IS стержней. С этой целью мы сначала попытались изолировать интактную ОС, содержащую растворимые и мембраносвязанные белки, из очищенных удочек карпа с помощью механического метода, описанного ранее для ОС стержня лягушки, показывающего типичную форму стержня [15].Однако наша попытка не увенчалась успехом, потому что мы наблюдали только ухудшение ОС удилища у карпа (см., Например, рис. 1Е). Таким образом, в данном исследовании мы получили мембраны OS вместо интактной OS из очищенных палочек и шишек карпа. Процедура, которую мы использовали, показана на рис. 1. Очищенные стержни (рис. 1A) и конусы (рис. 1B) были механически разрушены для разделения ОС и IS (рис. 1C и 1D) (см. Материалы и методы). Смесь испорченных и разделенных OS и IS помещали поверх ступенчатого градиента плотности сахарозы, 36/50% (мас. / Об.) Для стержней и 36/70% (мас. / Об.) Для колбочек, в пробирку, и затем центрифугировали, чтобы разделить их (рис. 1E и 1G для стержней и рис. 1F и 1H для шишек).На этом этапе OS и IS были нарушены, и они были практически в виде мембран, в основном содержащих мембраносвязанные белки. Эти мембраны в каждом интерфейсе были собраны и суспендированы в растворе Рингера.

Рис. 1. Очистка мембран ОС и ИС от очищенных палочек и колбочек.

Показаны микроскопические (ДИК) изображения фракций клеток на каждом этапе очистки с помощью дифференциальной интерференционной контрастной микроскопии. Очищенные стержни карпа (A) и шишки (B) пропускали через иглу 27 размера, чтобы отделить OS от IS, и полученные сломанные стержни (C) и колбочки (D) наслаивали на градиент плотности сахарозы, полученный в пробирку (рисунки слева от E / G и F / H) для центрифуги.Число на чертежах показывает плотность сахарозы (%, мас. / Об.). Были собраны разделенные мембраны на верхнем (E, F) и нижнем (G, H) интерфейсах. Масштабная линейка, 20 мкм по всей длине.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0173908.g001

Чтобы оценить, насколько эффективно разделение OS и IS мембран было достигнуто с помощью этой процедуры, мембраны были получены на верхнем интерфейсе (Рис. 1E для стержней и Рис. 1F для колбочек) и те, что на нижнем интерфейсе (рис. 1G для стержней и рис. 1H для колбочек), были исследованы количественно с помощью маркерных белков.

Визуальных пигментов использовали в качестве маркерного белка ОС. Их содержание в мембранах исходных очищенных палочек и колбочек, а также в четырех фракциях, полученных из верхней (стрелки на фиг. 1E и 1F) и нижней границы раздела (стрелки на фиг. 1G и 1H), были количественно определены спектрофотометрически (фиг. 2). Мембраны, полученные на каждой границе раздела, суспендировали в растворе Рингера в объеме, равном объему исходных общих мембран, полученных из очищенных палочек или колбочек. Далее мы описываем все мембраны, полученные из исходных очищенных палочек или колбочек, как просто мембраны с начальными стержнями или конусами, и указываем содержание белка в каждой верхней или нижней фракции как% от содержания в исходных мембранах.В случае палочек визуальный пигмент палочек, родопсин, был извлечен почти исключительно из верхней фракции (рис. 2А и таблица 1). Когда исходные мембраны стержней и мембраны в верхней части стержней были подвергнуты SDS-PAGE (фиг. 3A), были обнаружены толстые полосы родопсина (стрелки) (начальная и верхняя на фиг. 3A, соответственно). Напротив, в нижней фракции (нижняя фракция на фиг. 2A и нижняя часть на фиг. 3A) родопсин практически не обнаруживался. Все результаты, показанные на фиг. 2A и 3A, показали, что мембраны ROS собирались почти исключительно в верхней фракции.

Рис 2. Количественная оценка визуальных пигментов.

Количество зрительных пигментов измеряли спектрофотометрически в трех типах препаратов палочки (А) и конуса (В): мембраны из очищенных клеток в качестве исходных материалов (исходные), мембраны в верхней (верхняя фракция) и нижней (нижняя фракция) фракциях. . (A) Содержание родопсина измеряли в мембранах исходного стержня (левые панели), в верхней и нижней фракциях (средняя и правая панели, соответственно), все полученные из одинакового количества клеток и суспендированные в одном и том же объеме раствора Рингера.На каждой из верхних панелей кривая 1 (черная) показывает спектр поглощения до отбеливания, а кривая 2 (синяя) показывает спектр после полного отбеливания родопсина при освещении светом> 440 нм. Кривая 2 была вычтена из кривой 1 на каждой из верхней панели, чтобы получить разностный спектр, который показан на соответствующей нижней панели. По положительному поглощению родопсином (λ _max = 522 нм) определяли относительное содержание родопсина. (B) Содержание чувствительных к красному, зеленому и синему пигментов было измерено в исходных очищенных конических мембранах (левые панели), в верхней и нижней фракциях ((средняя и правая панели, соответственно).На каждой из верхних панелей кривая 1 (черная) показывает спектр поглощения до отбеливания. Чувствительный к красному пигмент сначала обесцвечивали светом> 675 нм (кривая 2), затем пигмент, чувствительный к зеленому, светом> 600 нм (кривая 3) и, наконец, пигмент, чувствительный к синему, светом> 440 нм (кривая 4). Кривая 2 вычиталась из кривой 1, чтобы получить разностный спектр чувствительного к красному цвету пигмента, который показан на соответствующей нижней панели (красная кривая 1 ‘, λ _max = 622 нм). Аналогичным образом были получены разностные спектры для чувствительного к зеленому цвету пигмента (зеленая кривая 2 ‘, т.е.д., кривая 2 — кривая 3; λ _max = 535 нм) и для чувствительного к синему пигмента (синяя кривая 3 ‘, т.е. кривая 3 — кривая 4; λ _max = 460 нм) для определения относительного содержания этих пигментов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0173908.g002

Рис. 3. Количественное определение субъединицы β АТФазы F1.

Количество субъединицы β АТФазы F1 определяли с помощью SDS-PAGE в препаратах мембран с четырьмя стержнями (A) и четырьмя конусами (B). (A) Стержневые мембраны в качестве исходных материалов (исходные), а также верхняя и нижняя фракции стержней (верхняя и нижняя, соответственно) подвергали SDS-PAGE.Гели окрашивали флуоресцентным красителем Иволга. В полосе, обозначенной как 4 × верхняя, применяли 4-кратный объем верхней фракции для точного количественного определения количества субъединицы β АТФазы F1. Стрелки указывают полосы мономера, димера и тетрамера родопсина, а стрелки указывают полосу β-субъединицы F1 АТФазы. (B) Аналогичная картина SDS-PAGE с использованием четырех препаратов конической мембраны. (C) Пример количественного определения субъединицы β АТФазы F1 с окрашиванием иволгой в препаратах мембран с четырьмя стержнями. Калибровочную кривую получали при окрашивании иволги с использованием известных количеств BSA (пустые прямоугольники и закрашенная линия), которую проводили параллельно с SDS-PAGE препаратов мембран стержней.По интенсивности сигнала β-субъединицы F1-АТФазы β в (A) количественно определяли количество β-субъединицы F1-АТФазы β в препаратах четырехстержневых мембран с использованием калибровочной кривой (направленная вниз стрелки). Обратите внимание, что субъединица β АТФазы F1 не была обнаружена в верхних фракциях в (A). (D) Аналогичная количественная оценка в препаратах с четырьмя конусными мембранами.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0173908.g003

В случае колбочек зрительные пигменты колбочек, чувствительные к красному, зеленому и синему цвету, преимущественно обнаруживались в мембранах верхней фракции (рис. 2B, левая и средняя панели), как и в случае стержней.Количество визуальных пигментов колбочек в нижней фракции было почти незначительным, как и в стержнях (рис. 2В, правые панели). Эти результаты ясно показывают, что как стержневые, так и конические OS-мембраны были эффективно собраны на верхней границе раздела (раствор Рингера / 36% -ная поверхность раздела сахарозы) и, следовательно, в верхней фракции, и было небольшое загрязнение OS-мембран в нижних фракциях.

Затем мы исследовали разделение мембран IS. Во-первых, разделение внутренних митохондриальных мембран было исследовано путем количественной оценки его маркерного белка, β-субъединицы F1-АТФазы [16], в верхней и нижней фракциях как палочек, так и колбочек.Когда исходные мембраны стержней и мембраны в верхней и нижней фракциях стержней (рис. 3A) или мембраны колбочек (рис. 3B) были подвергнуты SDS-PAGE, полоса была обнаружена при 55 кДа (стрелки) в полосе начального стержневые мембраны (рис. 3A, исходные) и мембраны исходных конусов (рис. 3B, исходные). Эта полоса была идентифицирована как субъединица β АТФазы F1 карпа (AB023582.1) с помощью нашей масс-спектрометрии, а также была четко обнаружена в нижних фракциях как палочек, так и колбочек (нижняя часть на рис. 3A и 3B, соответственно).Напротив, эта полоса была слабой в полосах верхних фракций как стержней, так и колбочек (верхняя часть на рис. 3A и 3B, соответственно). Количество субъединицы β АТФазы F1 в каждой из фракций (исходная, верхняя, 4 × верхняя и нижняя) определяли количественно путем измерения флуоресцентных сигналов иволги полосы на каждой дорожке с использованием BSA в качестве молярного стандарта (рис. 3C и 3D). и результаты показали, что маркер внутренней мембраны митохондрий минимально обнаруживался в верхней фракции (не обнаруживается в палочках и 3,5% в колбочках) и в основном в нижней фракции (84.8% в палочках и 54,6% в колбочках) (таблица 1, субъединица β АТФазы F1).

Затем мы определили, в какой фракции, верхней или нижней, присутствовали мембраны других клеточных органелл в IS. Таким образом, эти мембраны в этих фракциях были исследованы с помощью количественного иммуноблот-анализа с использованием трех маркерных белков: TOM20 для наружных мембран митохондрий [17, 18], Na ⁺ / K ⁺ α-субъединица АТФазы для плазматических мембран IS [19, 20] и калнексин для мембран ER [21, 22] (рис. 4). Как показано на фиг. 4A, каждое из антител или антисыворотки, использованных в анализе, детектировало единственную полосу в очищенных палочковидных и конусных мембранах, и молекулярная масса каждой детектированной полосы соответствовала известному значению целевого белка.Эти результаты показали, что использованные антитела и антисыворотка избирательно реагировали на белки-мишени.

Рис. 4. Оценка разделения мембран OS и IS с использованием TOM20, Na ⁺ / K ⁺ α-субъединицы АТФазы и калнексина в качестве маркерных белков.

(A) Специфичность антител, используемых для обнаружения TOM20, Na ⁺ / K ⁺ α-субъединицы АТФазы и антисыворотки к калнексину. Очищенные стержневые мембраны, содержащие 200 пмоль родопсина, и мембраны конусов, содержащие 6 пмоль общих пигментов колбочек, подвергали SDS-PAGE и окрашивали кумасси бриллиантовым синим (левая панель) или зондировали антителами или антисывороткой против каждого белка (правые три панели).(B-D) Количественный иммуноблот-анализ TOM20 (B), Na ⁺ / K ⁺ α-субъединицы АТФазы (C) и калнексина (D). На верхних панелях в каждой из (B) — (D) мембраны очищенных стержней, содержащие 200 пмоль родопсина, или очищенные мембраны конуса, содержащие 6 пмоль общих пигментов конуса (исходный), фракции верхней и нижней мембраны, полученные из того же количества пигментов очищенные клетки (верхний и нижний, соответственно) и серию разбавленных исходных палочкообразных и конусных мембран подвергали SDS-PAGE.Эти мембраны зондировали антителами или антисывороткой против каждого маркерного белка. Для точного определения количества целевых белков при необходимости применяли 4-кратный объем образцов (4 ×). Количество целевого белка в каждой из мембран определяли с помощью калибровочной линии, полученной из сигналов иммуноблота, полученных в разбавленной серии исходных палочкообразных или конусных мембран. На нижних панелях в каждой из (B) — (D) показаны примеры количественной оценки. Количество целевого белка в каждой фракции указано стрелкой на нижних панелях.С помощью этой оценки можно определить, сколько% целевого белка присутствует в каждой из мембран по сравнению с количеством в исходных палочковидных или конусных мембранах того же числа клеток.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0173908.g004

Затем три маркерных белка были количественно определены в исходных палочковидных и конусных мембранах, а также в верхней и нижней фракциях (рис. 4B – 4D и таблица 1). . На рис. 4В показан пример количественного определения TOM20, маркера наружных мембран митохондрий.Этот маркер был обнаружен в некоторой степени в верхней фракции (9,1% в палочках и 6,9% в колбочках), но гораздо больше в нижней фракции (42,5% в палочках и 58,2% в колбочках), как и маркер внутренней мембраны митохондрий, F1. Субъединица АТФазы β.

Маркер плазматической мембраны IS, Na ⁺ / K ⁺ α-субъединица АТФазы, был обнаружен как в верхней, так и в нижней фракциях, но маркер присутствовал немного больше в верхней фракции: процент маркера, присутствующего в верхних фракций было 65.7% в стержнях и 49,0% в колбочках, а в нижних фракциях было 40,2% в стержнях и 10,9% в колбочках (рис. 4C и таблица 1). Калнексин, маркер мембраны ER, также присутствовал как в верхней, так и в нижней фракции в виде плазматических мембран IS. Этот маркер был немного обогащен верхней фракцией в стержнях (26,5% в верхней фракции и 9,9% в нижней фракции), но обнаруживался почти одинаково в обеих фракциях в колбочках (35,5% в верхней фракции и 38,4% в нижней фракции). (Рис. 4D и Таблица 1).

Из этих результатов можно сделать вывод, что с помощью нашего метода разделения верхняя фракция содержит исключительно мембраны OS вместе с некоторыми из мембран IS (митохондриальные внутренние и внешние мембраны, плазматические мембраны IS плюс мембраны ER), а нижняя фракция содержит в основном митохондриальные мембраны и некоторые из них. плазматических мембран IS и мембран ER.Для удобства мы называем верхнюю фракцию фракцией, богатой OS, а нижнюю фракцию — фракцией, богатой IS. Чтобы различать каждую фракцию, полученную из палочек или колбочек, мы называем фракцию, богатую ОС, богатой АФК. Точно так же мы будем использовать термины RIS-богатая фракция (стержневая IS-богатая фракция), COS-богатая фракция и CIS-богатая фракция в дальнейшем.

Хотя фракция, обогащенная OS, содержит исключительно мембраны OS, она также содержит некоторые из мембран IS: плазматические мембраны IS, мембраны ER и, в меньшей степени, внутренние и внешние мембраны митохондрий.Все мембраны, которые мы использовали, сделаны из наших очищенных палочек или конусов. Эти очищенные клетки содержат OS, а также IS, состоящие из эллипсоида и миоида, но лишенные ядра и терминала (см. Рис. 1 в [2]). Из соображений структурной основы наших очищенных палочек и колбочек, плазматические мембраны IS и мембраны ER, вероятно, присутствуют гораздо меньше, чем митохондриальные мембраны, а также намного меньше, чем мембраны с высокой мембраной OS. По этой причине загрязнение плазматических мембран IS и мембран ER будет ограничено в нашей богатой OS фракции как палочек, так и колбочек.

В настоящем исследовании мы сосредоточились на COS-специфических / доминантных белках. Наша оценка количества маркерного белка, показанного выше, была основана на процентном содержании белков, обнаруженных в каждой из мембранных фракций, по сравнению с таковым в исходных палочковидных или конусных мембранах. Во фракции, обогащенной COS, наблюдалась контаминация белков CIS на 3,5–6,9% (таблица 1). Обратите внимание, что это загрязнение представляет собой процент от общего количества белков CIS, и, следовательно, фактическое загрязнение белков CIS зависит от общего количества белков CIS и общих белков COS.Наша предыдущая оценка объемов COS и CIS у карпа показала, что объем IS в ~ 6 раз превышает объем ОС [10]. Основываясь на этом соотношении объемов, мы оценили фактическое загрязнение белков CIS во фракции, обогащенной COS. Мы предполагаем, что в крайнем случае плотность мембраны и плотность белка в мембранах одинаковы для COS и CIS. При этом на основании распределения зрительного пигмента (~ 55% пигментов в исходных мембранах COS) и белков CIS (TOM20 и субъединица β АТФазы F1; 3.5–6,9% в исходных мембранах CIS) в богатой COS фракции, показанной в таблице 1, наш расчет показал, что количество загрязненных белков CIS, в основном содержащихся во внутренней и внешней мембранах митохондрий, может быть эквивалентно количеству Белки COS во фракции, богатой COS (белки COS: белки CIS = ~ 55% × 1: 3,5–6,9% × 6). Напротив, загрязнение белками COS во фракции, богатой CIS, может быть незначительным (белки COS: белки CIS = 3,5% × 1: 54,6–58,2% × 6). Поскольку нельзя игнорировать контаминацию белков CIS во фракции, богатой COS, мы идентифицировали COS-специфические / доминантные белки, исключив белки, обнаруженные во фракции, богатой COS, которая была минимально загрязнена мембранами COS.Мы также исключили белки, обнаруженные во фракции, богатой АФК (см. Ниже).

Идентификация COS-специфических / доминантных белков

Чтобы идентифицировать COS-специфические / доминантные белки, мы составили список белков, обнаруженных в каждой из фракций, богатых ROS, богатых RIS, богатых COS и богатых CIS, с использованием протеомного анализа методом дробовика с помощью LC-MS / MS. Фракция с высоким содержанием COS содержит значительно загрязненные мембраны CIS. Он также загрязнен мембранами ROS и RIS и мембранами красных кровяных телец, которые потенциально присутствуют в наших очищенных колбочках в небольшом количестве [4].Затем, чтобы найти COS-специфические / доминантные белки, белки, обнаруженные во фракциях с высоким содержанием COS и ROS, были значительно исключены из списка белков, обнаруженных во фракции с высоким содержанием COS. С помощью этого сравнения можно исключить не только общие белки, обнаруженные как во фракциях, богатых АФК, так и во фракциях, богатых COS, но также и белки CIS, загрязненные или обычно присутствующие во фракции, богатой COS.

В этом исследовании мы сосредоточились на белках, прочно связанных с мембранами, в качестве первого шага для идентификации COS-специфических / доминантных белков.Для этой цели мембраны в каждой из фракций, богатых ROS, богатых RIS, COS и богатых CIS, промывали для максимального удаления растворимых и связанных с мембранами периферических белков (см. Материалы и методы). Образцы SDS-PAGE мембран в каждой из фракций перед отмывкой (исходная, на фиг. 5A, например) и окончательно промытых мембран (промытых) показаны на фиг. 5A – 5D для обогащенных ROS, RIS-богатых, COS-богатых. и СНГ-богатые фракции соответственно. Образцы SDS-PAGE супернатантов после двукратной промывки буфером с низким содержанием соли и буфером с высоким pH четыре раза (промывка с низким содержанием соли и промывка с высоким pH, соответственно) показали, что большая часть удаляемых белков была смыта с мембран.

Рис. 5. Подготовка промытых мембран для ЖХ-МС / МС.

Мембраны во фракциях, богатых ROS (A), RIS-богатых (B), COS-богатых (C) и CIS-богатых (D), были интенсивно промыты буфером с низким содержанием соли и буфером с высоким pH для удаления растворимых и периферических мембранных белков в максимально возможной степени. На рисунках (A) — (D) SDS-PAGE мембран, полученных из исходных мембран (исходные), мембран, окончательно полученных после интенсивных промывок (промывка), и супернатантов, полученных во время промывок (промывка с низким содержанием соли, sup 1-2 и высокая pH отмывки 1–4) показаны для мембран, приготовленных из каждой фракции.В (E) показан пример геля, подвергнутого анализу ЖХ-МС / МС. Промытые мембраны, полученные из фракций, обогащенных ROS-, RIS-, COS- и CIS, подвергали SDS-PAGE, и области каждой дорожки вырезали из геля и подвергали расщеплению в геле для анализа LC-MS / MS. . Мембраны, используемые для SDS-PAGE в каждой дорожке в (E), были получены из 10 ⁶ стержней (промытые ROS), 4,7 × 10 ⁵ стержней (промытые RIS), 1,2 × 10 ⁵ колбочек (промытые CIS ) и 2,5 × 10 ⁴ конусов (промытый COS).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0173908.g005

Эти промытые мембраны в каждой из фракций, показанных на фиг. 5A – 5D, затем подвергали SDS-PAGE для разделения белков для анализа с помощью LC-MS. /РС. Во фракции, богатой АФК, наиболее распространенным белком является зрительный пигмент, родопсин (около 95%). Белки, выделенные в геле, были переварены для анализа LC-MA / MS, но большое количество родопсина, вероятно, препятствует анализу LC-MS / MS, маскируя другие протеолитические продукты, когда он включен.По этой причине полосы родопсина, мономер 30-40 кДа, димер 55-65 кДа и тример 80-90 кДа, были исключены из нашего настоящего анализа ЖХ-МС / МС. При анализе белков в других фракциях те же области были опущены, чтобы сравнить белки в равной степени. Следовательно, белки, присутствующие в исключенных областях, не анализировались, и белки, присутствующие рядом с этими исключенными областями, не могли быть проанализированы количественно. Области, обозначенные четырьмя прямоугольниками в каждой полосе на фиг. 5E, подвергали протеолизу и анализировали с помощью ЖХ-МС / МС.В результате мы идентифицировали 648, 971, 1064 и 629 белков из промытых фракций, богатых ROS, богатых RIS, богатых CIS и COS, соответственно, как общие белки, полученные в двух независимых экспериментах (таблицы S1 – S4).

Затем мы идентифицировали COS-специфические / доминантные белки во фракции, богатой COS (Таблица 2). Для этой цели мы использовали значение emPAI (экспоненциально измененный индекс содержания белка), которое, как сообщается, пропорционально количеству белка, присутствующего в образце, используемом для анализа ЖХ-МС / МС [23].Вкратце, мы использовали значения emPAI, полученные для того же количества клеток, в качестве показателя количества белка, присутствующего в промытых мембранах. Мы рассчитали долю белка во фракции, богатой COS, в общем количестве этого белка во фракциях, богатых COS и богатых CIS (показано как COS / (COS + CIS) в таблице 2). С помощью этой процедуры мы исключили белки, присутствующие в большем количестве во фракции, богатой CIS (то есть те белки, которые показывают COS / (COS + CIS) <0,5). Мы также исключили белки, присутствующие во фракции, обогащенной АФК, в количестве, аналогичном количеству во фракции, богатой ХОК (см. Методы в легенде к Таблице 2).После этой манипуляции в списке осталось 48 белков. Обратите внимание, что в идеале, но не на самом деле, визуальные пигменты не представлены в Таблице 2 или в Таблицах S1 – S4, потому что полосы, содержащие эти пигменты, не анализировались (см. Выше). Точно так же белки, присутствующие в полосах родопсина, не анализировались, а белки, присутствующие в области, близкой к этим полосам, не анализировались правильно. Из 48 белков уже известно, что 8 белков присутствуют только в COS (выделены жирным шрифтом в таблице 2), и этот факт гарантирует, что наша стратегия идентификации COS-специфических / доминантных белков верна.Однако 16 белков, о которых известно, что они локализованы вне COS, также остались в списке (белки с серым фоном в таблице 2). Остальные 24 белка без специального указания в таблице 2 могут быть специфически или преимущественно разделены на фракцию, обогащенную COS, во время нашего мембранного разделения.

Наш результат о том, что белки, о которых известно, что они локализуются за пределами COS, перечислены в таблице 2, может предполагать, что существует локальная разница плотности в мембранах, чтобы вызвать загрязнение мембран в нашем мембранном разделении с использованием градиента плотности.В любом случае результат показывает, что наш список (Таблица 2) содержит COS-специфические / доминантные белки, но их точная локализация должна быть подтверждена альтернативными способами, такими как иммуноцитохимия. Следует отметить, что белки, обнаруженные только во фракции с высоким содержанием COS, но не во фракции с высоким содержанием CIS (белки со значением COS / (COS + CIS), равным 1 в таблице 2), показывают низкие значения emPAI (таблица 2), что указывает на то, что уровни экспрессии этих белков низкие даже в COS. Кроме того, значения emPAI для большинства белков в Таблице 2 относительно низкие по сравнению со значением 28.3 α-субъединицы колбочкового трансдуцина. Из списка в таблице 2 мы исключили белки COS, присутствующие в ROS. Этот результат указывает на то, что в целом профили экспрессии белков аналогичны между ROS и COS у карпа в диапазоне молекулярных масс, исследованных в этом исследовании.

Локализация NCALD в колбочках

Подтверждение нашего разделения мембран было протестировано с использованием одного из белков-кандидатов, нейрокальцина δ B (NCALD), который был обнаружен конкретно во фракции COS в этом исследовании.Сообщается, что NCALD экспрессируется в амакриновых клетках и ганглиозных клетках [43], и его локализация также распознается в CIS [44], но не в COS. Как показано в таблице 2, а также в таблицах S3 и S4, мы обнаружили NCALD в COS, но не в CIS, и не в ROS или RIS (таблицы S1 и S2).

Мы исследовали локализацию NCALD в изолированных колбочках. Как сообщалось ранее [44], NCALD присутствовал в IS (анти-NCALD на фиг. 6A) так же, как митохондриальная аспартатаминотрансфераза 2 (анти-mAAT на фиг. 6A), белок-маркер внутренних мембран митохондрий в IS [45] .Кроме того, некоторые точечные сигналы NCALD были обнаружены также в COS (рис. 6A, анти-NCALD) в апикальной области COS, а также в основании COS, возможно, в каликовом отростке. Очевидное несоответствие между этим иммуноцитохимическим анализом (в основном присутствует в CIS и немного в COS) и нашим анализом LC-MS / MS, показанным в таблице 2 (присутствует только в мембранах COS), может быть связано с различием в мембранах, исследованных в этих исследованиях: в иммуноцитохимии зондировали нативные мембраны в живых клетках, в то время как в анализе ЖХ-МС / МС использовали интенсивно промытые мембраны.Эта возможность была исследована с помощью иммуноблоттинга.

Рис. 6. Субклеточная локализация нейрокальцина δ B (NCALD) в палочках и колбочках.

(A) ДИК-изображения (слева) двойных (вверху), одинарных (средний) и двойных (внизу) конусов, а также иммунофлуоресцентные изображения антисыворотки против анти-mAAT (средние панели) и изображения NCALD (правые панели). Шкала 10 мкм. ОС, внешний сегмент. IS, внутренний сегмент. (B) Отрицательный контроль (A) с использованием контрольной мышиной сыворотки (средний для mAAT) и кроличьей сыворотки (справа для NCALD).Эти контрольные сыворотки лишь слабо пометили колбочку. (C) Иммуноблот-анализ немытых мембран на фракции, богатые ROS, RIS, COS и CIS (богатые ROS, богатые RIS, богатые COS и богатые CIS, соответственно). Мембраны в этих фракциях подвергали SDS-PAGE и окрашивали CBB или зондировали антителом против NCALD. Сигналы NCALD наблюдались в мембранах фракций, богатых COS и богатых CIS (стрелка). Мембраны фракции, обогащенной АФК и РИС, получали из 2,0 × 10 ⁵ стержней.Мембраны COS- и CIS-богатой фракции были получены из 2,0 × 10 ⁵ и 5,0 × 10 ⁴ колбочек, соответственно, для наблюдения аналогичной интенсивности сигналов иммуноблоттинга NCALD. (D) Иммуноблот-сигналы NCALD (стрелка) на мембранах, полученных из 2,0 × 10 ⁵ очищенных мембран конусов (очищенных конусов), промытых мембран COS, полученных из 2,5 × 10 ⁶ очищенных конусов (промытые COS), и полученных промытых мембран CIS. из 2,5 × 10 ⁶ очищенных конусов (промытые CIS).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0173908.g006

В нашем иммуноблот-анализе на немытых мембранах фракций, богатых ROS и RIS (богатых ROS и богатых RIS на рис. 6C), мы не наблюдали сигналов NCALD (стрелка), в то время как мы обнаружили положительные сигналы в не промытых фракциях, богатых COS и богатых CIS (COS-богатые и богатые CIS на фиг. 6C). Интенсивность сигнала была выше во фракции, богатой CIS (количество очищенных колбочек, используемых на фиг. 6C, было меньше для фракции, богатой CIS, см. Легенду к фиг. 6C), что согласуется с результатами иммуноцитохимического исследования, показанного на фиг. 6A. .Однако в интенсивно промытых мембранах (промытые мембраны), которые использовались для анализа ЖХ-МС / МС, мы не наблюдали никаких сигналов NCALD (рис. 6D, стрелка), даже когда мембраны, применяемые для SDS-PAGE, увеличивались в 12,5 раз для промытых. COS-мембраны и в 50 раз промытые CIS-мембраны (промытые COS и промытые CIS, соответственно на фиг. 6D), чем использованные на фиг. 6C.

Нейрокальцин является членом семейства нейрональных сенсоров кальция [46, 47] и считается растворимым в условиях низкого содержания Ca ²⁺.Следовательно, возможно, что большая часть NCALD была удалена с мембран во время промывки мембран, используемых для анализа ЖХ-МС / МС, поскольку концентрации Ca ²⁺ в промывочных буферах были низкими. Это может быть причиной того, что NCALD не был обнаружен в промытых CIS-богатых мембранах. Предыдущие исследования показали, что NCALD может напрямую взаимодействовать с гуанилилциклазой 1 сетчатки (ROS-GC1) [44], которая, как известно, локализуется на мембранах стержневой ОС. В шишках карпа гуанилатциклаза шишек (GC-C [6] или гуанилциклаза 3) экспрессируется как гомолог бычьей ROS-GC1.GC-C был обнаружен в богатых COS мембранах в нашем анализе ЖХ-МС / МС (таблица S3). Возможно, что небольшого количества NCALD, связанного с GC-C в промытых мембранах с высоким содержанием COS, будет достаточно для обнаружения в анализе ЖХ-МС / МС (таблица 2 и таблица S4), но не в анализе иммуноблоттинга ( Рис 6D). GC-C был фактически обнаружен в нашем анализе LC-MS / MS в промытых COS-мембранах, но не в промытых CIS-мембранах (таблицы S3 и S4, соответственно). Однако GC-C также был обнаружен во фракции, богатой ROS (таблица S1), вероятно, из-за загрязнения конусов при приготовлении очищенного стержня (см. Материалы и методы).По этой причине GC-C не указан в таблице 2.

Индуцированная прионами дегенерация фоторецепторов начинается с накопления неправильно свернутого прионного белка в колбочках в двух разных местах: ресничках и ленточных синапсах | Acta Neuropathologica Communications

Обнаружение PrPSc в сетчатке после инъекции внутримозгового скрепи.

В текущих экспериментах прионная инфекция сетчатки была достигнута интрацеребральной инокуляцией мышей 1,0 × 10 ⁵ единиц ID50 штамма скрейпи 79А.Известно, что с помощью этого метода прионы распространяются на сетчатку через зрительный тракт и зрительный нерв [6, 16]. Прогрессирование инфекции сетчатки отслеживали с помощью иммуногистохимии (IHC) или иммунофлуоресценции (IF) с моноклональным антителом D13 против PrP для обнаружения PrP. У неинфицированных мышей PrPKO сигнал PrP не был обнаружен с помощью IHC или IF (рис. 1a, b). Однако у неинфицированных мышей, экспрессирующих PrP, окрашивание PrP было четко обнаружено с помощью IHC и IF в нерегулярном комковатом распределении во внешнем плексиформном слое (OPL) и в более диффузном паттерне во внутреннем плексиформном слое (IPL) (рис.1в, г). Это было похоже на то, что было описано ранее другими [10, 17, 19]. Кроме того, плавный слабый сигнал наблюдался во внутреннем сегменте (IS) фоторецепторного слоя (рис. 1c, d) [54]. Все эти сайты, вероятно, представляли нормальный клеточный PrP (PrPC), поскольку они не наблюдались у мышей PrPKO (рис. 1a, b).

Фиг. 1

Экспрессия PrPC в неинфицированной PrP с нокаутом (PrPKO) и сетчатке дикого типа (WT) с использованием антитела D13. a , b В сетчатке PrPKO нормальный PrP хозяина (PrPC) не обнаруживался иммунофлуоресцентным окрашиванием (красный) или иммуногистохимическим окрашиванием (коричневый).Однако фоторецепторы в ОС сетчатки ПрПКО показали красную аутофлуоресценцию, частый, но изменчивый артефакт иммунофлуоресцентных исследований сетчатки. c , d В сетчатке WT PrPC наблюдали с помощью обоих методов окрашивания в OPL и IPL, а более слабые уровни были обнаружены в INL и IS. Масштабная линейка в a = 20 мкм. OS внешний сегмент, IS внутренний сегмент, ONL внешний ядерный слой, OPL внешний плексиформный слой, INL внутренний ядерный слой, IPL внутренний плексиформный слой

Через 82 дня после инфицирования (dpi) Яркое точечное окрашивание PrP в пятнистых агрегатах разного размера наблюдалось в неравномерном рассеянном распределении вдоль слоев IS и OPL (рис.2б). Это окрашивание, вероятно, было связано с заболеванием PrPSc, поскольку оно не наблюдалось у неинфицированных мышей (фиг. 1c, d, 2a). При 104 и 118 dpi окрашивание PrPSc в IS и OPL было более обширным, а при 118 dpi окрашивание PrPSc часто наблюдалось по всей окружности IS и OPL (рис. 2c, d). При 118 dpi также наблюдалось уменьшение ширины внешнего ядерного слоя (ONL), указывающее на потерю ядер фоторецепторных клеток. При 131 dpi размер ONL был еще больше уменьшен, а окрашивание PrPSc в IS и OPL уменьшилось по интенсивности (рис.2д). При 162 dpi все слои сетчатки были истончены (рис. 2f), а толщина ONL теперь составляла всего 2–3 клетки в большинстве областей. Слабое окрашивание PrPSc было дополнительно уменьшено в областях IS и OPL, но теперь оно было немного более заметным во внутреннем плексиформном слое (IPL). Интересно, что этот тип нейродегенерации не наблюдался у неинфицированных мышей PrPKO, что предполагает, что потеря PrP сама по себе не вызывает дегенерацию фоторецепторов (неопубликованные результаты нашей группы).

Рис. 2

Время окрашивания PrP антителом D13 в сетчатке в разное время после инфицирования прионами скрепи штамма 79A. a Незараженная мышь, показывающая PrPC (пурпурный) в основном в OPL. b , c На 82 и 104 днях после инфицирования (dpi) неправильно свернутую, ассоциированную с заболеванием форму PrP (PrPSc) (пурпурный) теперь можно увидеть в IS и OPL на все более широких участках. d При 118 dpi PrPSc широко распространен в IS, и депонирование не ограничивается отдельными отдельными ячейками. Некоторые небольшие отложения видны в ONL, и ONL начинает истончаться по мере отмирания фоторецепторов. e При 131 dpi PrPSc размещается в IS и OPL, а ONL намного тоньше. f Окрашивание PrPSc проявляется меньше при 162 dpi в IS и OPL, а ONL значительно тоньше. Пунктированный PrPSc присутствует в IPL (стрелка). Масштабная полоса в a = 20 мкм

Динамика отложения PrPSc и дегенерации сетчатки, наблюдаемая в этих экспериментах с использованием непрямого IF, была аналогична нашим предыдущим данным с использованием обнаружения PrP с помощью IHC [54]. Однако детали морфологии агрегатов PrPSc были более четко видны IF. Поскольку палочки и колбочки фоторецепторов являются основными клетками, обычно присутствующими в области IS, и эти клетки также имеют отростки, простирающиеся в OPL, раннее отложение PrPSc, вероятно, было связано с одним или обоими из этих типов фоторецепторных клеток.Для изучения типов клеток, связанных с PrPSc в этой модели, мы использовали метод IF с двойным окрашиванием на PrP и антитела, реагирующие с белками, специфичными для колбочек или палочек (таблицы 1, 2).

Отложение PrPSc происходит сначала в фоторецепторах колбочек

При 67 dpi PrPSc был обнаружен в нескольких отдельных клетках в области IS, и этот PrPSc был связан с обнаружением аррестина конуса в тех же отдельных клетках (рис. 3a). Аналогичным образом, при 104 dpi окрашивание PrPSc было связано с обнаружением опсина конуса (рис.3b) и GNAT2 (трансдуцин альфа-2), еще один специфичный для колбочек маркер (рис. 3c). В обоих этих примерах окрашивание PrPSc происходило во внутренней части IS, тогда как белки опсина конуса и GNAT2 находились в основном во внешнем сегменте (OS), то есть дистальнее PrPSc, но, по-видимому, находились в одних и тех же индивидуальных клетках. в качестве маркерных белков колбочек. Напротив, GNAT1 (трансдуцин альфа-1), палочко-специфический белок, не ассоциировался совместно с PrPSc при 104 dpi, который был расположен в темных местах, не окрашенных GNAT1, т.е.е. шишки (рис. 3г). Поскольку было показано, что штаммы скрепи демонстрируют клеточно-специфическую инфекционность [8], мы протестировали штамм 22L, который также нацелился на фоторецепторы колбочек перед палочками (рис. 3e). Эти наблюдения показали, что отложение PrPSc сначала появилось во внутренних сегментах фоторецепторов колбочек. Дополнительные исследования показали, что стержни также заражались, начиная со 118 точек на дюйм (см. Ниже).

Рис. 3

PrPSc сначала накапливается во внутренних сегментах фоторецептора конуса. a При 67 dpi на фоторецепторах колбочек, отмеченных Cone Arrestin (зеленый), присутствуют редкие мелкие точечные отложения PrPSc (стрелка).Пурпурный цвет в наружном сегменте — автофлуоресценция родопсина. b Опсин конуса (белый) маркирует внешние сегменты конуса с отложениями PrPSc (пурпурный), связанными в основном с внутренними сегментами конуса (желтая стрелка), с разрешением 104 dpi. Переход от слабого к интенсивному окрашиванию колбочки опсином отмечает границу между IS колбочки и OS колбочки (синяя стрелка). c Другой белок внешнего сегмента конуса GNAT2 (зеленый) показывает очевидную связь с PrPSc (пурпурный), окрашивая внутренние сегменты конуса при 104 dpi (стрелки). d При разрешении 104 dpi, маркер для стержня, GNAT1 (зеленый) окрашивает внутренний и внешний сегменты стержня, но не оставляет конусов (наконечники стрелок). Скопления PrPSc (пурпурный) присутствуют в темных областях, свободных от GNAT1 (стрелки). и Отдельный эксперимент, проведенный со штаммом 22L scrapie, показывает такую же ассоциацию PrPSc с внутренними сегментами колбочек при 123 dpi, предполагая, что специфичность колбочек не является штаммом. Шкала шкалы = 5 мкм. a , b , d — конфокальные z-стеки, c , e — широкопольные изображения

Затем сетчатка была исследована с помощью конфокальной микроскопии на предмет повреждения колбочек двойным окрашиванием анти-PrP и антигеном. -конус опсин.При 104 dpi наблюдалось набухание внутренних сегментов некоторых PrPSc-положительных колбочек (рис. 4b). Этот отек никогда не наблюдался в неинфицированной сетчатке (рис. 4а) и, следовательно, представлялся признаком повреждения, вызванного прионной инфекцией. Это набухание было типичным для некротической гибели клеток, как описано в дегенерации колбочек на модели мышей rd10 [37]. При 118 dpi обильный PrPSc наблюдался в колбочках и в клетках внутреннего сегмента, лишенных опсина колбочки (рис. 4c), что указывает на то, что к этому времени прионная инфекция распространилась на палочки.Шесть последовательных оптических срезов через конус, очерченный на рис. 4c, показали, что PrPSc (красный) и опсин конуса (зеленый) в основном разделены внутри этого конуса (рис. 4d). Однако обнаружение опсина колбочек, очерчивающего внешний край цитоплазмы, не наблюдалось в клетках, лишенных PrPSc, что позволяет предположить, что это необычное распределение опсина колбочек может быть проявлением индуцированного прионами повреждения в этом конусе.

Рис. 4

Раннее накопление PrPSc, связанное с повреждением фоторецепторов колбочек. a Неинфицированная сетчатка показывает нормальную морфологию колбочек и распределение опсина колбочек (зеленый) во внешнем сегменте. b При 104 dpi ранние отложения PrPSc связаны с внутренними сегментами конуса (стрелка), а некоторые PrPSc, по-видимому, локализуются с опсином конуса (белые области на вставке с увеличением × 2). c При 118 dpi виден раздутый дистрофический конус с PrPSc (желтая рамка), и некоторое количество PrPSc также присутствует в стержнях (синяя стрелка). d Последовательные конфокальные срезы, отстоящие друг от друга на 0,5 мкм, увеличивают внутренний сегмент раздутого конуса от c и предполагают, что PrPSc находится внутри внутреннего сегмента вместе с неправильно заданным опсином конуса.Масштабная линейка в a и c = 5 мкм. Масштабная линейка в серии d = 2 мкм. a – c — конфокальные z-стеки

Обнаружение PrPSc-связанных повреждений во внутреннем сегменте

Чтобы понять, как отложение PrPSc может вызывать повреждение колбочковых (и стержневых) фоторецепторов, мы искали связь PrPSc с дополнительным ключевым внутренним сегментные конструкции. Во-первых, взаимосвязь между отложением PrPSc и ресничкой, соединяющей внутренний и внешний сегменты фоторецепторных клеток (рис.5а) исследовали двойным окрашиванием на PrP и Centrin3, белок, расположенный внутри ресничек палочек и колбочек. На ранних стадиях заболевания, при 104 dpi, отложение PrPSc часто может быть обнаружено около точки входа соединительной реснички (Fig. 5b). В некоторых случаях PrPSc непосредственно прилегает к ресничке, поскольку конфокальный анализ показал, что PrPSc, базальное тельце и ресничка могут быть обнаружены в пределах одного и того же среза (Fig. 5c). Отложение PrPSc в этом сайте могло повлиять на способность ресничек переносить белки фототрансдукции между IS и OS.Известно, что дисфункция ресничек вызывает гибель фоторецепторов при других формах дегенерации сетчатки [43].

Рис. 5

Раннее накопление PrPSc и повреждение внутреннего сегмента. a Рисунок фоторецептора колбочки показывает ключевые структуры, связанные с отложением PrPSc. cc соединительная ресничка, bb базальное тело, r корешок, m митохондрии, cp ножка конуса , rs ленточный синапс. b Антитело против центрина3 (зеленый) маркирует соединяющую ресничку и базальное тело (маленькие зеленые точки) всех фоторецепторов.Накопление PrPSc (пурпурный) на входе в соединительную ресничку (стрелка), увеличено на вставке. c Серийные конфокальные срезы 0,5 мкм ( c1–6 ), показывающие относительную локализацию PrPSc, реснички и базального тельца. d Окрашивание неинфицированного фоторецептора колбочки аррестином (зеленый). Стрелка указывает вероятное положение соединительной реснички. e 118 dpi показывает сетчатку, окрашенную на аррестин колбочек (зеленый) и PrP (пурпурный). Звездочками отмечены конусы, у которых отсутствуют внешние сегменты, желтые стрелки указывают на положение соединительных ресничек и связанных с ними отложений PrPSc (пурпурных), а наконечники стрелок показывают дистрофические внешние сегменты. f , g Конфокальный анализ, показывающий плоскости xy и yz набухших колбочек из e , подтверждает присутствие PrPSc в месте соединения реснички (стрелка) между IS и OS. ч В неинфицированной сетчатке антитело против корней (зеленое) окрашивает корешки фоторецепторов. i , j В более поздние дни после заражения PrPSc (пурпурный) увеличивается, корешков становится меньше, и они деформируются. Масштабные линейки: b , e = 5 мкм; c = 1 мкм; d = 2 мкм; f , г = 2 мкм; ч = 10 мкм. b , d , e Проекции максимальной интенсивности (MIP) конфокальных z-стеков h , i , j — широкопольные изображения

Чтобы проверить эту идею, мы окрашивали на аррестин конуса, a колбочко-специфический белок фототрансдукции, который, как известно, перемещается между IS и OS [2, 49]. В неинфицированной сетчатке аррестин колбочек присутствовал в OS, IS, ONL (фиг. 5d) и ножках (фиг. 6). Наружные сегменты колбочки сетчатки с разрешением 118 dpi казались сморщенными и деформированными по сравнению с неинфицированной колбочкой, а в некоторых случаях внешние сегменты отсутствовали (рис.5г – ж). Внутренние сегменты колбочек в сетчатке с разрешением 118 dpi часто были опухшими, и отложения PrPSc можно было обнаружить в точке сужения между IS и OS, т.е. в месте расположения соединительной реснички (Fig. 5d-g). Вместе эти данные указывают на то, что отложение PrPSc во внутреннем сегменте может влиять на цилиарный транспорт аррестина колбочек и / или др. Белков. Мы также исследовали ассоциацию отложений PrPSc с другой заметной структурой внутреннего сегмента, корешком, который выполняет функцию стабилизации соединительной реснички [59] (рис.5а). Для этого мы использовали антитело против корневой системы вместе с D13 против PrP. Поскольку PrPSc, по-видимому, накапливается во внутреннем сегменте при 104 и 118 dpi, морфология корешков изменяется, и плотность корешков уменьшается (Рис. 5h – j). Хотя PrPSc обычно не был связан с rootletin, эти данные предполагают, что накопление PrPSc могло повредить внутренний сегмент и его структуры, включая корешки.

Рис. 6

Время повреждения фоторецепторов колбочек. a Антиконусный аррестин (зеленый) окрашивает фоторецептор колбочек, внутренние сегменты (желтая стрелка) и ножки (зеленая стрелка) у неинфицированной мыши.Антитело D13 против PrP окрашивает PrPC (пурпурный) у основания ножек конуса в OPL (пурпурная стрелка). Автофлуоресценция тоже присутствует в ОС. b При 67 dpi аррестин колбочки и PrP распределяются аналогично неинфицированной сетчатке (пурпурная стрелка). c Небольшие отложения PrPSc присутствуют в IS с разрешением 104 dpi и связаны с конусами (стрелки). d При 118 dpi количество колбочек уменьшилось (зеленый), большинство ножек конусов исчезло из OPL, а остальные колбочки являются дистрофическими (желтая стрелка), их внешние сегменты отсутствуют.PrPSc широко распространен в ИС и ОНЛ. e Несколько колбочек (зеленые) остаются при 131 dpi, ножки (стрелка) намного меньше по размеру и связаны с плотными скоплениями PrPSc (стрелка). f Колбочки не обнаруживаются при 162 dpi, а ONL имеет толщину 2–3 ядра, что указывает на то, что палочковые фоторецепторы в основном погибли. Макрофаг или микроглиальная клетка (желтая стрелка), содержащая PrPSc, присутствует в остатках ОС. Масштабная линейка в a = 20 мкм, применима ко всем изображениям.

Обнаружение связанных с PrPSc повреждений во внешнем плексиформном слое

Раннее накопление PrPSc и повреждение внутренних сегментов колбочек привело нас к более тщательному изучению фоторецепторов колбочек.Мы использовали двойное окрашивание анти-PrP плюс антиконусный аррестин, чтобы проследить прогрессирование отложения PrPSc и изменения общей морфологии колбочек с течением времени прионной инфекции от 67 до 162 dpi.

В неинфицированной сетчатке небольшие плотные пятна окрашивания PrP были замечены в OPL только витреад (по направлению к стекловидному телу) на многих ножках колбочек, экспрессирующих аррестин колбочек (рис. 6a), и это, как предполагалось, было PrPC, как это было видно. у неинфицированных мышей. Аналогичное окрашивание также наблюдалось при 67 dpi (рис.6б). При 104 dpi окрашивание PrP в OPL наблюдалось у основания некоторых ножек колбочек, как у неинфицированных мышей. Более очевидные изменения были видны при 118 dpi, где ножек конуса было меньше и меньше по размеру (рис. 6d). PrPSc был в изобилии в области IS как на колбочках, так и на палочках, а окрашивание PrPSc в OPL было точечным и диффузным и, по-видимому, не зависело от ножек колбочек (рис. 6d). При 131 и 162 dpi окрашивание PrPSc в IS и OPL оставалось сильным и было похоже на 118 dpi. Однако в это время большинство ножек колбочек отсутствовали, а ONL истончались из-за большой потери ядер как колбочек, так и стержневых клеток (рис.6д, е). Эти данные предполагают, что отложение PrPSc в областях IS и OPL могло вызывать патогенные эффекты, приводящие к гибели как колбочек, так и палочек.

Потеря ножек колбочек и шариков палочек, визуализированная окрашиванием GLUT1

Транспортер глюкозы 1 (GLUT1), как известно, является отличным маркером для визуализации клеточной поверхности в тканях. Поэтому мы использовали двойное окрашивание анти-GLUT1 и анти-PrP для изучения деталей локализации PrP относительно ножек колбочек и шариков палочек в области OPL после прионной инфекции сетчатки.Перед прионной инфекцией ножки конуса были обнаружены как треугольные пространства темной формы, очерченные GLUT1, и только на многих из этих ножек наблюдалось пятно сгруппированного грубого окрашивания PrPC (Supp Fig. 1a). Кроме того, на том же рисунке также были видны многочисленные окончания стержневых клеток, то есть сферулы, и они, по-видимому, представляли собой меньшие округлые темные формы, очерченные GLUT1, в основном от склеры (по направлению к склере) до конических ножек (дополнительный файл 1: рис. 1a). ). После заражения прионами при 118 dpi ножки конуса было трудно распознать или они исчезли, а количество и размер шариков палочек уменьшились (дополнительный файл 1: рис.1б). Позже, при 153 dpi, большая часть сфер и ножек отсутствовала, и все слои фоторецепторов (OS, IS, ONL, OPL) были дегенерированы (дополнительный файл 1: рис. 1c). Эти результаты продемонстрировали прогрессирующее повреждение как палочек, так и колбочек, связанное с присутствием склеры отложения PrPSc в и внутри OPL.

Сравнительное обнаружение PrP, ленточных синапсов и других структур в неинфицированной сетчатке

В фоторецепторном слое, граничащем с OPL, колбочки и палочковые фоторецепторные клетки связаны с отростками горизонтальных клеток и палочковидных биполярных клеток с образованием ленточных синапсов, которые имеют уникальные электрофизиологические и морфологические особенности [36].Первоначально мы сравнили расположение некоторых из этих структур у неинфицированных мышей, чтобы определить их нормальную морфологию, наблюдаемую с помощью конфокальной и электронной микроскопии. Двойное окрашивание неинфицированной мыши на аррестин колбочки и PrP показало, что PrPC расположен в больших плотных кластерах, витреад к ножкам колбочек (фиг. 7a). Электронная микроскопия OPL продемонстрировала стержневые сферулы с одиночными большими ленточными синапсами и конические ножки, содержащие множество коротких ленточных синапсов (рис. 7b). Примечательно, что сравнение изображений ЭМ и световой микроскопии показало, что участки переплетенных дендритов из биполярных и горизонтальных клеток (рис.7b) соответствовали кластерным областям PrPC, показанным на рис. 7a.

Рис. 7

В неинфицированной сетчатке экспрессия PrPC сконцентрирована в основании конических ножек. a В OPL окрашивание PrPC (желтые стрелки) присутствует у основания ножек колбочек, выделенных аррестином против колбочек (стрелки). b Электронная микрофотография (ПЭМ) OPL, показывающая ножку конуса (cp) с множеством круглых митохондрий (m) и тремя ленточными синапсами (стрелки). Желтая пунктирная линия окружает предполагаемую область PrPC от до , которая содержит множество дендритных отростков из биполярных и горизонтальных клеток.Некоторые дендриты синапсируются на лентах (желтые наконечники стрелок) или образуют синапсы плоского контактного типа (наконечники стрелок пурпурного цвета) с коническими ножками. Ленточные синапсы (стрелки) также видны в шариках стержней (r). c Конфокальный z-стек неинфицированной сетчатки показывает общую взаимосвязь PrP с палочковидными биполярными клетками (PKCα) и горизонтальными клетками (кальбиндин). d – h Одинарный оптический срез 0,130 мкм с большим увеличением, взятый из области в рамке на панели c , показывает, что PrP не связан с PKC и что некоторые кальбиндин-положительные процессы (стрелка) находятся в пределах PrP-положительной области, но ассоциация непонятна. i Конфокальное изображение z-стека сетчатки, окрашенной на дендриты биполярных клеток конуса (SCGN), ленты (CtBP2) и PrP, показывает плотный участок PrPC vitread с кластером коротких лент (прямоугольник) на ножке конуса. j – l Один оптический срез 0,130 мкм, взятый из рамки на панели e, показывает PrPC в тесной ассоциации с SCGN-положительными дендритами, а некоторая совместная локализация видна как белый цвет (стрелки). Масштабная линейка в a = 10 мкм, b = 1 мкм, c = 2 мкм, d = 1 мкм, i = 4 мкм, j = 0.5 мкм

Чтобы понять ассоциацию PrPC с этими структурами, неинфицированную сетчатку окрашивали одновременно антителами против PrP и белками, экспрессируемыми горизонтальными и биполярными клетками (рис. 7c – f). Конфокальный микроскопический анализ полных z-стеков и отдельных оптических срезов 130 нм использовался для выявления относительного расположения процессов и PrP. Дендриты палочковых биполярных клеток были помечены анти-PKCα, и, хотя они присутствовали очень близко к окрашенной PrP области под ножками конуса, они не были напрямую связаны с PrP (рис.7в, г). Сходным образом, Calbindin-позитивные горизонтальные клеточные процессы не были четко связаны с плотными кластерами PrP (Fig. 7c-h). Затем мы трижды окрашивали анти-PrP, анти-CtBP2, маркер лент и анти-секретагогин, белок, экспрессируемый в 8 из 12 типов биполярных клеток колбочек [13, 42]. В этом эксперименте дендриты биполярных клеток колбочек, экспрессирующие секретагогин (SCGN), показали тесную ассоциацию с PrPC (Fig. 7i-l). Эти результаты предполагают, что PrPC высоко экспрессируется очень близко к ножкам конуса и, таким образом, может объяснять раннее накопление PrPSc в колбочках по сравнению с палочками.

Повреждение ленточных синапсов, наблюдаемое при окрашивании анти-CtBP2

Используя двойную иммунофлуоресценцию, сочетающую анти-PrP с анти-CtBP2 антителами, специфичными для ленточных структур, мы изучили развитие PrPSc-ассоциированных изменений на компонентах ленточного синапса с течением времени после приона. инфекционное заболевание. Как в неинфицированной сетчатке, так и в сетчатке с разрешением 82 dpi ленточные синапсы были видны склерадно по отношению к OPL как непрерывная полоса линейных или подковообразных структур, а PrP в основном находился в сгруппированных рыхлых агрегатах, расположенных вдоль самых нижних лент (рис.8а, б). При 104 dpi ленты были похожи на 82 dpi, но окрашивание PrP было немного более заметным в области ленты, чем раньше (рис. 8c). При 118 dpi (фиг. 8d) количество лент значительно уменьшилось (фиг. 8l), и PrP откладывался между лентами, а не под ними (фиг. 8d, j) по сравнению с неинфицированной сетчаткой и более ранними временными точками. Этот PrP, скорее всего, был PrPSc, поскольку в неинфицированной сетчатке в этом месте не наблюдалось окрашивания. Интересно, что при большем увеличении небольшие скопления PrPSc были обнаружены на подковообразных кривых многих лент (рис.8j, к). Более того, скопления PrPSc никогда не обнаруживались непосредственно на лентах, где расположены синаптические везикулы. Это указывает на то, что PrPSc находится на постсинаптической стороне ленточных синапсов (Fig. 8j). В более поздние моменты времени, 131, 153 и 163 dpi, ленты постепенно разрушались, как и ядра колбочек и стержневых клеток в ONL (рис. 8e – g, l). Исчезновение лент коррелировало со значительным увеличением PrPSc при 118 dpi (рис. 8l vs m). Таким образом, появление PrP внутри ленточных подков коррелирует с началом потери ленточных синапсов и предполагает, что отложение PrPSc может быть ответственным за это повреждение.

Рис. 8

Время исчезновения ленточных синапсов в OPL. a , h Неинфицированная сетчатка показывает множество подковообразных лент, окрашенных CtBP2 (зеленый), склерадных до плотности PrPC (пурпурный). Большинство лент не связаны с PrPC, см. Панель h. b , i При 82 dpi количество лент такое же, как и у незараженных, но на ножках конуса PrP выглядит ярче и пунктирнее, что указывает на накопление нового PrPSc. c Сетчатка с разрешением 104 точек на дюйм похожа на 82 точки на дюйм. d , j 118 dpi, ленты в OPL выглядят неорганизованными и их количество значительно уменьшается, а отложения PrPSc видны внутри подковообразных дуг, но не соприкасаются с большинством лент ( j , желтые стрелки). e , k При 131 dpi накопление PrPSc достигло пика, и большинство лент исчезло . Остальные подковообразные ленты показывают связь с PrPSc ( k , желтая стрелка). f , g На поздних точках на дюйм ONL резко истончился, осталось мало лент, широко распространен PrPSc. мкл На графике показано количество полосок / мкм OPL сетчатки, инфицированной скрепи, при dpi по сравнению с неинфицированной. Каждая точка представляет собой счетчик из одного поля зрения. мкм Количественное определение интегральной интенсивности флуоресценции PrP (пурпурной) / мкм OPL сетчатки, инфицированной скрепи, при dpi по сравнению с неинфицированной. Каждая точка представляет собой интегрированные измерения интенсивности из одного поля зрения. Линии медианное значение, нс не значимо, * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0.001, **** п <00.0001. Статистические данные рассчитывались с использованием однофакторного дисперсионного анализа с множественными сравнениями. Масштабные линейки: a – g = 4 мкм; h – k = 1 мкм

Ассоциация PrPSc с биполярными клетками палочек и колбочек возле ленточных синапсов

Расположение PrPSc, рядом с лентами, но не касаясь их, предполагает, что эти отложения были связаны с постсинаптической частью ленточных синапсов. Известно, что дендриты палочко-конусных биполярных клеток и горизонтальных клеток составляют постсинаптические элементы ленточных синапсов в OPL [36].Здесь исследование возможных взаимодействий PrPSc с палочковидными биполярными клетками было выполнено путем двойного окрашивания анти-PrP и анти-PKCα, которое специфично для палочковых биполярных клеток.

У неинфицированных мышей и мышей, инфицированных прионами 82 dpi, клеточные тела палочкообразных биполярных клеток были видны только на витрине к OPL, и дендритные отростки от этих клеток распространялись вверх через OPL в область ножек конуса и сферул палочек (рис. 9а). , б). PrP обнаруживался в основном в склере OPL к палочковидным биполярным клеткам (рис.9а, б). Однако, начиная с 104 dpi и продолжаясь 118 dpi, отложения PrP наблюдались в новом месте, на концах дендритных отростков стержневых биполярных клеток, которые синапсируются с лентами (Fig. 9c, d). Это также было более детально видно с помощью конфокальной микроскопии (сравните рис. 9f и g). Поскольку отложения в этих местах наблюдались только после заражения прионами, считалось, что они являются PrPSc.

Рис. 9

Накопление PrPSc на концах дендритов стержневых биполярных клеток и исчезновение дендритов.Эпифлуоресцентный микроскопический анализ. a В неинфицированной сетчатке PrP (пурпурный) (синяя стрелка) и PKCα-положительные палочковые биполярные клетки (зеленые) видны рядом друг с другом в OPL. Многие бутоны (синяя стрелка) присутствуют на дендритных концах стержневых биполярных клеток. b При 82 dpi OPL выглядит как незараженный. Звездочкой отмечено тело стержневой биполярной клетки в INL. c При 104 dpi окрашивание PrP появляется на концах дендритов. d При 118 dpi большинство PKCα-положительных дендритов отображают PrP на концах отростков (бутоны) (стрелка). e К 131 dpi большинство дендритов и дендритных бутонов исчезло, тела биполярных клеток остались (стрелка), а PrPSc распределяется в больших агрегатах. Конфокальный анализ. f Проекция максимальной интенсивности показывает окрашивание неинфицированной сетчатки на PKCα и PrP. Стрелки указывают на PKCα-положительные биполярные палочки с явными бутонами на концах дендритов. г Сетчатка с разрешением 118 точек на дюйм показывает PrPSc, расположенный в виде бусинок на дендритах, часто заменяющих бутоны. Увеличение прямоугольников слева и справа показано ниже на панелях h — k . h Конфокальное изображение показывает ассоциацию PrPSc с дендритами и кончиками дендритов в области правого поля от г . i – k Конфокальные изображения показывают объединенное окрашивание PrP и PKC левой области бокса в г . l При большом увеличении конфокального изображения антитело против CtBP2 маркирует ленты (стрелки) и подтверждает отложения PrPSc (пурпурный) на кончиках дендритов (зеленый), инвагинирующих, но не соприкасающихся с лентами. Масштабные линейки: a – e = 5 мкм; f , г = 3 мкм; h – k = 2 мкм; л = 0.5 мкм

При большем увеличении этот PrPSc имел вид бусинок на нити, идущей вдоль отростков (рис. 9h – k), и PrPSc, по-видимому, замещал или перекрывал исходное окрашивание отростков PKCα. Это было специфично для инфицированной сетчатки во временных точках 104–118 dpi (рис. 9c, d, g) и не наблюдалось в неинфицированной сетчатке или сетчатке 82 dpi (рис. 9a, b). Точное расположение отложений PrPSc в ленточном синапсе на концах дендритов стержневых биполярных клеток было подтверждено с помощью конфокального анализа среза, тройного окрашенного на PrP, PKCα и CtBP2 (рис.9л). На поздних этапах болезни (131 dpi) большинство стержневых биполярных дендритных структур дегенерировало (рис. 9e), однако тела стержневых биполярных клеток, по-видимому, уменьшились только примерно на 50%, начиная с 118 dpi, и они не уменьшились. далее по истечении этого времени (рис. 10а – д). Аксоны, дендриты и дендритные бутоны исчезли вместе с телами клеток. Это резко контрастировало с самими палочками и колбочками, которые в основном были устранены в это время после заражения.

Рис. 10

Изменения биполярных клеток палочек во время инфекции.Окрашивание a анти-PKCα (зеленый) у неинфицированной мыши показывает нормальное распределение и морфологию палочковых биполярных клеток. Многочисленные дендриты (стрелка) доходят вверх к синапсу с фоторецепторами в ONL от каждого тела клетки (острие стрелки). b При 104 dpi стержневые биполярные клетки выглядят как неинфицированные мыши. c К 118 dpi количество биполярных клеток упало примерно наполовину по сравнению с неинфицированными, а некоторые тела клеток имеют мало связанных дендритов, если вообще имеют вообще (стрелка). d На поздней стадии заболевания, при 163 dpi, количество палочковых биполярных клеток значительно снижено по сравнению с неинфицированной сетчаткой, и лишь немногие дендриты достигают OPL (стрелка). e Количество палочкообразных биполярных клеток на 100 мкм сетчатки с течением времени. Каждая точка представляет собой количество отсчетов из одного поля зрения, линия — медиана, нс = несущественно, * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, **** p 0,0001 статистика односторонним дисперсионным анализом с тестом множественных сравнений. Масштабная линейка в a = 20 мкм

Дендриты биполярных клеток колбочки , , синапсы в основном с фоторецепторными клетками колбочек в OPL и могут быть помечены с использованием антител против секретагогина (SCGN) [13].Чтобы проверить ассоциацию отложений PrPSc с дендритами биполярных клеток колбочек, мы трижды окрашивали сетчатку на PrP, SCGN и CtBP2 (Fig. 11a-d). Как было также показано на фиг. 7, PrPC у неинфицированных мышей, как было обнаружено, находится в тесной ассоциации с SCGN-положительными дендритами под кластерами коротких лент (фиг. 11a). Сходным образом, отдельные конфокальные срезы показали, что PrPC смешан с SCGN-положительными дендритами биполярных клеток колбочек (фиг. 11b). У инфицированных мышей при 104 и 118 dpi окрашивание анти-PrP антителом D13 выявило увеличение PrPSc среди SCGN-положительных дендритов, где они образуют синаптические связи с ножками конуса (рис.11a – f), и это отложение совпало с предыдущим обнаружением PrPSc на кончиках дендритов стержня биполярных клеток под подковообразными ленточными синапсами, присутствующими в фоторецепторах стержней (Fig. 9h – l). Время и место этого увеличения окрашивания PrP предполагали, что эти отложения, вероятно, были связанной с заболеванием формой PrP. Несмотря на разрушение большинства ленточных синапсов в колбочках и исчезновение дендритов биполярных клеток колбочек, количество SCGN-положительных биполярных клеток колбочек не уменьшалось во время болезни (рис.11г – к). Таким образом, и палочки, и колбочки были однозначно чувствительны к индуцированному прионами повреждению по сравнению с другими нейронами сетчатки.

Рис. 11

Ассоциация PrPSc с биполярными клетками колбочек. a Конфокальный z-стек неинфицированной сетчатки показывает тельца биполярных клеток, положительных по секретагогину (пурпурные стрелки) и их зеленые дендритные отростки, связанные с PrP (пурпурный) в плотных кластерах (желтые стрелки), которые включают короткие ленточные синапсы (желтые). b Единственный конфокальный срез, взятый из прямоугольника на панели a , показывает PrP в тесной ассоциации с дендритами биполярных клеток колбочек (зеленый) под скоплениями коротких лент (желтые), обычно встречающихся на ножках колбочек.Подковообразные ленты в стержневых шариках (синие стрелки) не связаны с PrP или SCGN. c В конфокальном z-стеке при 118 dpi тела биполярных клеток колбочек (пурпурная стрелка) кажутся нормальными, но окрашивание PrP увеличивается в OPL. d Один конфокальный срез, взятый из прямоугольника на панели c, показывает увеличение PrP среди SCGN-положительных дендритов с некоторым PrP, перекрывающим SCGN, что указывает на колокализацию (белая стрелка). PrP также присутствует в подковообразных ленточных синапсах в стержнях (синие стрелки). e , f Широкопольные изображения с разрешением 104 dpi показывают многочисленные примеры кластеров PrP, локализующихся на концах SCGN-положительных дендритов (синие стрелки), происходящих из биполярных клеток колбочек (пурпурные стрелки). г Число биполярных ячеек колбочек на мм по сравнению с точками на дюйм. Каждый символ представляет собой счетчик из одного поля зрения. Разные символы обозначают разных животных . Линия представляет собой медианное значение. h – k окрашенная антисекретагогином сетчатка из неинфицированной и три разных точки на дюйм показывают относительное количество SCGN-положительных клеток.ns = не значимо, статистика односторонним дисперсионным анализом с тестом множественных сравнений. Масштабные линейки: a , c = 4 мкм; b, d = 1 мкм; e, f = 10 мкм; h – k = 25 мкм

Идентификация PrPSc вблизи дендритов и бутонов горизонтальных клеток

Наряду с дендритными отростками биполярных клеток палочек или колбочек дендриты двух горизонтальных клеточных нейронов (HC) составляют триаду отростков, которые инвагинируют фоторецептор в каждом ленточном синапсе [36].Поэтому HC также изучали во время прионной инфекции сетчатки с использованием двойного окрашивания анти-PrP и антикальбиндином, который экспрессируется на теле клетки, дендритах и бутонах HC. У неинфицированных мышей тельца HC были прикреплены к OPL, а отростки и бутоны в основном находились в OPL (рис. 12a, b), а сгруппированные агрегаты PrP, наблюдаемые ранее, не ассоциировались ни с HC, ни с их отростками. После заражения скрепи при 104 dpi тела, отростки и бутоны HC не изменились (рис. 12c, d).Как и ожидалось, скопления PrP, которые ранее наблюдались у неинфицированных мышей, отсутствовали, и теперь PrP в основном рассеялся в виде небольших точечных или линейных отложений в OPL, которые были рядом, но немного отделены от бутонов HC (рис. 12c, d). Это различие в морфологии PrP позволило предположить, что этот материал был PrPSc. При 118 dpi бутоны HC были менее различимы, а PrPSc все еще был похож на 104 dpi (рис. 12e, f). Связи между органами HC и PrP по-прежнему не было. Эта взаимосвязь была подтверждена с помощью конфокального анализа тройного окрашенного среза (рис.12i – l), где при большом увеличении было очевидно, что кальбиндин-положительные бутоны не контактировали с PrPSc (фиг. 12j), тогда как PrPSc контактировал с PKCα, маркером палочковых биполярных клеток (фиг. 12k). При 131 и 153 dpi отростки HC и вся область OPL были атрофированы, и повреждение оказалось серьезным. Однако отложения PrPSc были более консолидированными, и, что удивительно, большинство тел УВ остались нетронутыми (рис. 12g, h, m).

Рис. 12

Временной и конфокальный анализ ассоциации PrP с горизонтальными клетками. a, b В неинфицированной сетчатке мыши антикальбиндин маркирует горизонтальные тела клеток (желтая стрелка), дендриты (синие стрелки) и бутоны (наконечники стрелок). Пурпурные плотности PrPC (длинная желтая стрелка) окружены горизонтальными клеточными бутонами и дендритами. c , d При 104 dpi кальбиндин-положительные бутоны (стрелки) находятся рядом, но не касаются новых отложений PrPSc (пурпурный). e , f При 118 dpi PrPSc (пурпурный) более широко распространен, а количество бутонов значительно сокращается.PrPSc находится рядом, но не контактирует с горизонтальными компонентами ячейки. г , ч В более поздние моменты времени 131 и 153 dpi, ONL истончается из-за потери ядер фоторецепторов. Немного, если таковые имеются, бутонов с горизонтальными ячейками. Большие отложения PrPSc (стрелка) видны в OPL, но не в горизонтальных телах клеток. i При очень большом увеличении сетчатка с разрешением 118 точек на дюйм показывает PKCα-положительный дендрит биполярных клеток палочки (зеленый) рядом с калбиндин-положительными (желтыми) горизонтальными клеточными бутонами (синие стрелки). j Отложение PrPSc (пурпурный) очень близко, но не касается бутонов горизонтальной ячейки (синяя стрелка). k При слиянии трех каналов белый цвет указывает на ассоциацию отложения PrPSc (пурпурный) с кончиком дендрита биполярной клетки стержня (зеленый). l На карикатуре изображены предыдущие три панели с добавлением предполагаемого местоположения шариков стержня (rs) и лент (r). m Удивительно, но количество горизонтальных клеточных тел существенно не меняется со временем.Масштабные линейки: a , c , e , g , h = 5 мкм; b , d , f = 2 мкм; i – l = 0,5 мкм

Таким образом, при 118 dpi было доказано отложение PrPSc в OPL на ленточных синапсах палочковых фоторецепторов. Хотя PrPSc не контактировал напрямую с пресинаптическими лентами (CtBP2), он был связан с постсинаптическими элементами синапсов. PrPSc был обнаружен на дендритных бутонах палочковых биполярных клеток (PKCα), где они инвагинировали ленточные синапсы, и на дендритах конических биполярных клеток (SCGN), прилегающих к ленточным синапсам.Бутоны HC (кальбиндин) не показали накопления PrPSc. Эти данные предполагают, что прионная инфекция и отложение PrPSc на отростках биполярных клеток палочек и колбочек могут оказывать токсическое действие на ленточные синапсы, приводя к повреждению и гибели как палочек, так и колбочек.

Электронная микроскопия внешнего плексиформного слоя подтверждает потерю синапсов

Анализ OPL с помощью просвечивающей электронной микроскопии подтвердил многие результаты, полученные с помощью конфокальной микроскопии. ТЭМ был выгоден тем, что позволял видеть все конструкции одновременно.Срезы от неинфицированных мышей показали множество окончаний аксонов фоторецепторов (стержневые шарики и ножки колбочек), содержащие ленточные синапсы, большинство из которых были связаны с триадой инвагинирующих дендритных отростков из горизонтальных и биполярных клеток. Стержневые сферулы содержат одну большую круглую митохондрию и ленточный синапс, в то время как колбочки содержат несколько маленьких митохондрий и 3-5 ленточных синапсов (Рис. 13a). На ранней стадии заболевания (104 точек на дюйм) общая морфология была подобна неинфицированным мышам (рис. 13b), однако на некоторых ножках колбочек вокруг ленточных синапсов наблюдались опухшие дистрофические дендритные процессы, что свидетельствует о том, что фоторецепторы колбочек начинали дегенерировать (рис.13б). В более поздние моменты времени (Рис. 13c – f) типичные ленточные синапсы триады отмечались редко, а стержневые сферулы и колбочки на ножках, если присутствовали, часто были дистрофическими. Частые структуры оборота, указывающие на наличие аутофагосом, были отмечены рядом или вместо ленточных синапсов как в палочках, так и в колбочках. Короче говоря, эти ультраструктурные данные подтвердили выводы флуоресцентной микроскопии о том, что в поздние моменты времени все элементы ленточных синапсов дегенерировали.

Рис. 13

Просвечивающая электронная микроскопия показывает график изменений внешнего плексиформного слоя. a Неинфицированная сетчатка показывает многочисленные стержневые шарики (r), каждая из которых содержит один ленточный синапс (стрелка) и митохондрию (m). Конические ножки (cp) содержат множественные ленточные синапсы (желтые стрелки) и митохондрии (m). На вставке показан увеличенный конический ленточный синапс с лентой (стрелка) и типичная триада, состоящая из двух инвагинирующих горизонтальных клеточных отростков (h) и одного биполярного клеточного отростка (bp). Многие биполярные и горизонтальные клеточные отростки присутствуют на конусе ножек (звездочки). b При разрешении 104 dpi большинство стержневых шариков выглядят нормально с наличием ленточных синапсов.Ножка конуса (cp) в центре имеет опухшие дистрофические дендритные отростки в ленточных синапсах (красная стрелка). Под ножкой (звездочка) присутствуют биполярные и горизонтальные клеточные отростки. c При 137 dpi OPL выглядит дезорганизованным с аномальными сферическими стержнями (красная стрелка), плавающим ленточным синапсом (синяя стрелка) без инвагинирующих дендритных отростков, аутофагическим завитком (синяя стрелка) и дистрофическим дендритом (красная стрелка) в ленточном синапсе в конической ножке. Клетка микроглии (мг). d , e , f Примеры аутофагических оборотов (красные стрелки) в стержневых сферах с разрешением 137 dpi. Шкала a-c = 2 мкм; d , e , f = 1 мкм

Мороженое с персиками и сливками в мини-рожках {68 калорий!}

Вкусные низкокалорийные мини-рожки мороженого: персиковое и кремовое белковое мороженое! 4 ингредиента, и их легко приготовить.

Перейти к рецепту

Калорийность и макросы для каждого рожка мороженого составляют 68 калорий, 7 граммов белка, 9 граммов углеводов и 0 граммов жира.

Это лето было жарким! Иногда по утрам, когда я смотрю на свой телефон, я вижу предупреждение: ЧРЕЗВЫЧАЙНЫЙ ТЕПЛО.

Итак, неудивительно, что я делаю протеиновое мороженое с таким разнообразием вкусов и способов, как я могу себе представить. Когда к нам на ужин приходят друзья или семья, и мы планируем мороженое на десерт, я часто делаю собственное протеиновое мороженое и ем его, пока все остальные едят мороженое с жиром / сахаром. Никто даже не замечает, что я ем более здоровую версию, а иногда я даже ничего не говорю! Мне просто становится легче, если я буду придерживаться моего плана по поддержанию веса!

Эта последняя идея мороженого «Персики и сливки» возникла, потому что я получил от Clean Simple Eats образец упаковки их нового вкуса «Персики и сливки»! Это одно из преимуществ регистрации в партнерских программах в качестве блоггера — ОБРАЗЦЫ !! (см. мой другой рецепт протеина CSE, Caramel Toffee здесь!)

С несколькими дополнительными ингредиентами, которые могли быть или не понадобились, я использовал протеиновый порошок, чтобы приготовить сливочное мороженое с персиками и сливками.(если вы хотите попробовать этот вкус протеинового порошка, мой код скидки — AMYROSKELLEY)

Как я приготовил это протеиновое мороженое

Ингредиенты, которые я решил использовать, чтобы мое персиковое мороженое и сливочное мороженое было сливочным и сладким, включали:

Протеиновый порошок Peaches & Cream . Я использовал бренд Clean Simple Eats. Если бы у меня не было этого, я бы использовал ваниль и добавлял персики, протертые или смешанные, чтобы придать персиковый аромат.
Обезжиренное молоко. Я обычно использую миндальное молоко для мороженого и протеиновых коктейлей, но на этот раз я хотел использовать немного молока, чтобы переключить его и, возможно, сделать его немного более сливочным.
Смесь для ванильного пудинга без сахара. Если вы были в моем блоге какое-то время, то знаете, Я ОБОЖАЮ МОИ смеси для пудинга! С 20 калориями на столовую ложку они добавляют столько кремообразности, густоты и сладости!
Простой греческий обезжиренный йогурт — еще один ингредиент, который я часто использую в блогах.В нем мало калорий и много белка. Из него получится небольшой загуститель, если вам захочется протеина.
Персик ! Я только что нарезал персик, но вы, безусловно, можете сделать пюре из ваших ингредиентов в блендере.
И, наконец, волшебство — 15 калорийных рожков мороженого ! В рожках мороженого марки Keebler всего 15 калорий !! Какая находка!

После того, как все ингредиенты смешаны и смешаны, я кладу все это в блюдо, подходящее для морозильной камеры, и даю ему замерзнуть.Затем, после замораживания, поскольку я использовал мини-рожки, я использовал мини-лопатку для печенья (примерно 2-3 лопатки на рожок) и достал из нее 8 рожков. Это сделало мороженое 68 калорий на рожок.

И все. Это действительно не могло быть проще.

Если вам нравится этот рецепт, возможно, вам понравится

Смешайте протеиновый порошок, молоко, смесь для пудинга и йогурт в блендере.
Вылейте в блюдо и посыпьте смесью измельченных персиков.
Заморозка на 6-8 часов!
Заполнив рожки мороженого, я получил 8 рожков по этому рецепту.

Порция: 1 рожок | Калории: 68 ккал | Углеводы: 9 г | Белок: 7 г | Жиры: 0 г

Пищевая ценность

Персики и мороженое с протеином в сливках

Количество на порцию

% дневной нормы *

* Процент дневной нормы основаны на диете в 2000 калорий.

PIN ЭТО ДЛЯ ПОЗЖЕ И ПОСЛЕДУЮЩИЕ МНЕ НА ПИНТЕРЕСТЕ!

Другие рецепты, которые могут вам понравиться

Ресурсы для похудания

Конусы мороженого Quest Nutrition S’mores

Quest Nutrition S’mores в рожке мороженого.Разве это не звучит лучше всего? Вам нужно это полезное для здоровья лакомство с высоким содержанием белка.

Урожайность: 5 порций

Размер порции: 1 рожок мороженого

Время подготовки: 30 мин

Время приготовления: 18 мин

Общее время: 3 часа

Состав:

Шоколадное мороженое

Зефирный пух

Крошки Грэма

Вафельный рожок

¾ мерная ложка Quest® Vanilla Milkshake Protein Powder
¼ чашки несладкого миндального молока
¼ чашки низкокалорийного подсластителя
1½ столовой ложки овсяной муки
½ взбитого яйца
1 столовая ложка яичных белков
1 чайная ложка ванильного экстракта

Метод:

Мороженое

1.В маленькой кастрюле налейте ½ стакана молока и яичный желток. Отложите в сторону.

2. Добавьте оставшийся 1 стакан молока, Quest Protein Powder®, подсластитель и какао-порошок в блендер и взбивайте в течение 10 секунд или до получения однородной массы. Отложите в сторону.

3. Нагрейте смесь молока и яичного желтка на слабом-среднем огне.

4. Взбивать венчиком 5 минут, не давая желтку взболтать.

5. Вылейте яичную смесь в блендер и взбивайте в течение 5 секунд.

6. Поместите блендер в холодильник на 1 час, чтобы он остыл.

7. Перелейте в мороженицу и следуйте инструкциям производителя. Мороженое должно быть готово через 15 минут.

8. Выньте мороженое из машины, поместите в герметичный контейнер и заморозьте примерно на 1 час.

Пух

В миску, подходящую для использования в микроволновой печи, добавьте Quest Bar® и миндальное молоко и поставьте в микроволновую печь на 30 секунд.
Добавьте смесь в кухонный комбайн и перемешивайте в течение 5 секунд.
Добавьте Quest® Protein Powder и перемешивайте в течение 15 секунд или до загустения и взбивайте.

Крошки

Поместите Quest Bar® в микроволновую печь на 25 секунд.
Дайте остыть в течение 1 минуты.
Микроволновая печь в течение дополнительных 25 секунд.
Поставить в холодильник на 5 минут. Разбейте на кусочки размером в четверть.
Поместите кусочки в мини-блендер и измельчите до мелкой крошки. Отложите в сторону.

Вафельный конус

Нагрейте вафельницу до среднего.
В небольшой миске смешайте все ингредиенты венчиком.
Нанесите на вафельницу антипригарный кулинарный спрей.
Поместите 1 столовую ложку жидкого теста в центр вафельницы.
Варить 2 минуты или до золотистого цвета.
Немедленно выньте вафлю и сформируйте ее вокруг конического цилиндра. Дать застыть 15 секунд.
Снимите и отложите в сторону, чтобы конус застыл.

Сборка

Нанесите 1 столовую ложку ворса на края каждой рожки.
Добавьте 2 маленьких шарика мороженого в каждый рожок.
Сверху посыпьте мороженое панировочными сухарями и подавайте.

Информация о питании:

Калорий: 150

Белки: 19 г

Жиры: 6 г

Чистые углеводы: 5 г (4 грамма сахара)

Волокно: 4 г

Всего углеводов: 20 г

P / CAL: 51%

кому еще шишки помогают перезимовать / Новости города / Сайт Москвы

Как сделать белку из шишек и пластилина

Приготовьте следующее:

Пошаговое выполнение поделки из шишек «Белка»:

Сайт для мамочек и бабушек — ХРАНИТЕЛЬНИЦ семейных кучек

Поиск

Наша группа ВКонтакте

Рубрики

Счетчик

Счетчик Яндекс

Аналитика

рекламный блок 1

рекламный блок 2

рекламный блок 3

помощь детям

СУПЕР РЕКЛАМА

рекламный блок 4

рекламный блок 5

рекламный блок 6

Поделки из ШИШЕК — 35 лучших идей + инструкция.

(7 новых идей)

ПАВЛИНЫ И ИНДЮКИ.

ВОРОБЬИ из сосновых шишек

ЕЖИКИ и МЫШКИ

ИЗ СОСНОВОЙ ШИШКИ.

Осенние поделки из шишек своими руками для школы

Осенний букет из листьев и шишек

Быстрые и красивые поделки из шишек и желудей своими руками для детского сада

Поделка осенняя фантазия из шишек

Все новинки поделок из шишек и каштанов

Поделки из шишек и пластилина для детей 4-5 лет в детском саду

Поделки из шишек и листьев на тему осень 1-2 класс

Ежик из природного материала и шишек

Как сделать сову из шишек

Белка из пластилина и шишки

Белочка из шишек

Для поделки понадобятся:

Семейная Кучка

Идея поделки

из лущеных шишек.

(7 новых идей)

ПОДЕЛКИ ИЗ ВЕРХУШЕК ШИШЕК.

(берем верхнюю часть шишки)

Птицы из шишек

(сосновых и еловых)

ПИНГВИНЫ.

СОВЫ И ПТЕНЧИКИ.

ПАВЛИНЫ И ИНДЮКИ.

ВОРОБЬИ из сосновых шишек

ЦАПЛИ, ЛЕБЕДИ И СТРАУСЫ из шишек.

ЕЖИКИ и МЫШКИ

ИЗ СОСНОВОЙ ШИШКИ.

ЧЕЛОВЕЧКИ как поделки из шишек.

(несколько способов).

Белка из шишек: поделка. Как сделать белку из шишек?

Инструкция по подготовке природного материала для поделки

Инструкция по подготовке природного материала для поделки

Белочка из шишки и бархатного картона

Белка из шишек и пластилина

Белка – поделка из шишек и синельной проволоки

Белочка с мордочкой из синель-проволоки

Мастер-класс «Белочки из шишек»

Белочка-пирамидка из шишек

Белка из шишек: поделка. Как сделать белку из шишек?

Инструкция по подготовке природного материала для поделки

Инструкция по подготовке природного материала для поделки

Белочка из шишки и бархатного картона

Белка из шишек и пластилина

Белка – поделка из шишек и синельной проволоки

Белочка с мордочкой из синель-проволоки

Мастер-класс «Белочки из шишек»

Белочка-пирамидка из шишек

О хорошем урожае шишек белки узнают заранее

четыре интересных факта. Как ещё проходит подготовка к зиме

Как белка готовится к зиме

Как ещё проходит подготовка к зиме

Как люди помогают белкам

Белка Шишка — rrrrrrr

Поделка «Белка» из шишек

МОЗГ Сверху ВНИЗ